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                            檢測(cè)殘留物萊克多巴胺的含量試劑盒說明書
                            更新時(shí)間:2019-06-04 點(diǎn)擊量:1605

                             

                                                 2016-01

                            萊克多巴胺

                            快速檢測(cè)試劑盒說明書

                            一、原理

                            本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法,在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物萊克多巴胺將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗萊克多巴胺抗體,加入酶標(biāo)記物后TMB底物顯色,樣本吸光值與其所含殘留物萊克多巴胺的含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物萊克多巴胺的含量。

                            二、試劑盒特性

                            • 試劑盒靈敏度:   0.05ppb
                            • 孵育溫度:       25
                            • 孵育時(shí)間:       30min15min
                            • 樣本檢測(cè)下限

                                    ······································· 0.2ppb

                            尿        ······································· 0.1ppb

                            • 交叉反應(yīng)率

                            萊克多巴胺(Ractopamine ···················· 100%

                            多巴酚丁胺(dobutamine  ····················· < 1%

                            沙丁胺醇(Salbutamol  ························ <0.1%

                            克倫特羅(Clenbuterol·························  <0.1%

                            • 樣本回收率

                            組織、尿樣    ····························  60%~120%

                            三、試劑盒組成

                            1

                            微量測(cè)試孔

                            每條8孔,一板12條

                            2

                            標(biāo)準(zhǔn)液×6瓶

                            (1ml/瓶)

                            0ppb

                            0.05ppb

                            0.15ppb

                            0.45ppb

                            1.35ppb

                            4.05ppb

                            3

                            酶標(biāo)記物

                            7ml

                            紅色帽

                            4

                            抗體工作液

                            7ml

                            藍(lán)色帽

                            5

                            底物A液

                            7ml

                            白色帽

                            6

                            底物B液

                            7ml

                            黑色帽

                            7

                            終止液

                            7ml

                            黃色帽

                            8

                            20X濃縮洗滌液

                            15ml

                            白色帽

                            9

                            2X濃縮提取液

                            50ml X 2

                            透明帽

                            四、所用儀器、試劑

                            具備的儀器:酶標(biāo)儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平(感量0.01g)、恒溫箱、打印機(jī)

                            微量移液器:?jiǎn)蔚?/span> 20200µl、單道1001000µl、多道30300 µl

                                  劑:氫氧化鈉、濃鹽酸

                            五、樣本前處理步驟

                            • 樣本處理前須知

                            a)實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭,吸取不同試劑時(shí)要更換吸頭。

                            b)實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈,必要時(shí)可對(duì)實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔,以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

                            • 樣本前處理需配制:

                            配液1   0.2M 鹽酸

                            取 17.2ml 濃鹽酸加去離子水定容至 1L

                            配液2   1M 氫氧化鈉

                                稱取4g 氫氧化鈉固體去離子水定溶至    

                                100ml

                            配液3   樣本提取液

                                2X濃縮提取液用去離子水11稀釋

                            • 樣本處理: 

                            a組織樣本的處理方法

                            • 稱取 2 ± 0.05g 均質(zhì)后的組織于50ml離心中,加入3ml 0.2M鹽酸(見配液1)充分振蕩3min
                            • 再加入600ul 1M 氫氧化鈉(見配液2)溶液和2.4ml 樣本提取液(見配液3)溶液充分振蕩3min,室溫4000r/min 以上離心10min
                            • 50 µl上層液體用于分析。(注:離心后若有脂肪層,去除脂肪層或撥開脂肪層,取清澈液體進(jìn)行分析)。

                            樣本稀釋倍數(shù):  4

                            注:此方法可與克倫特羅,沙丁胺醇處理方法通用。

                            b尿樣樣本的處理方法

                            50µl清亮尿樣直接測(cè)定(如果尿樣渾濁一定要過濾或4000r/min離心10min,直至得到清亮尿樣),暫不使用的樣本應(yīng)冷凍保存。

                            樣本稀釋倍數(shù):  1

                            六、 酶標(biāo)免疫分析程序:

                            • 測(cè)定前應(yīng)須知:
                            • 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫(20-25)。
                            • 使用之后立即將所有試劑放回28
                            • ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性,正確的洗板操作是ELISA測(cè)定程序中的要點(diǎn)。
                            • 所有恒溫孵育過程,避免光線照射,用蓋板膜蓋住微孔板。
                            • 操作步驟:
                            • 28冷藏環(huán)境中取出所需試劑,室溫(20-25)平衡30min以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
                            • 取出框架及需要數(shù)量的微孔,將不用的微孔放入自封袋,保存于28
                            • 配液:洗滌液配制

                            將15ml濃縮洗滌液(20倍濃縮)用去離子水

                            按照1:19稀釋(1份濃縮洗滌液+19份去離子

                            水),或按所需用量配制洗滌液。

                            • 編號(hào):將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
                            • 加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50µl/孔到各自的微孔中,然后加酶標(biāo)記物50µl/孔,再加入50µl/孔的抗體工作液,用蓋板膜蓋板,輕輕振蕩混勻,25℃環(huán)境反應(yīng)30min
                            • 將孔內(nèi)液體甩干,用洗滌液250µl/孔洗板45次,每次間隔15-30秒,用吸水紙拍干(拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。
                            • 顯色:加入底物A50µl/孔,再加入底物B50µl/孔,輕輕振蕩混勻,25環(huán)境中避光顯色15min
                            • 測(cè)定:加入終止液50µl/孔,輕輕振蕩混勻,設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處(建議用雙波長450/630nm檢測(cè),5min內(nèi)讀數(shù)),測(cè)定每孔OD值。

                            七、結(jié)果判定

                            結(jié)果判定有兩種方法,粗略判定可用第1種方法,定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含萊克多巴胺量成負(fù)相關(guān)。

                            1、粗略判定:

                            用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.3,樣本2的吸光度值為1.0,標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是:0ppb2.243 0.05ppb1.8160.15ppb1.4150.45ppb0.741.35ppb0.3134.05ppb0.155。則樣本1的濃度范圍是1.35ppb4.05ppb;樣本2的濃度范圍是0.15ppb0.45ppb,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中萊克多巴胺實(shí)際濃度。

                            2、定量分析

                            1)百分吸光率的計(jì)算,標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的吸光度值的平均值(雙孔)除以個(gè)標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值,再乘以100%,即

                             

                            百分吸光%)=

                            B

                            ×100%

                            B0

                            B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值

                            B0—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

                            2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算

                            以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),以萊克多巴胺標(biāo)準(zhǔn)品濃ng/ml)的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中萊克多巴胺實(shí)際濃度。

                            若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。

                            八、 注意事項(xiàng)

                            • 室溫低于25℃或試劑及標(biāo)本未回到室溫(2025℃)會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
                            • 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會(huì)伴隨著標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
                            • 混合要均勻,否則會(huì)出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。
                            • 反應(yīng)終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。
                            • 不要使用過了有效日期的試劑盒;稀釋或攙雜使用會(huì)引起靈敏度、OD值變化;不要交換使用不同批號(hào)的盒中試劑。
                            • 不用的微孔板放進(jìn)自封袋重新密封;標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對(duì)光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。
                            • 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。標(biāo)準(zhǔn)品1的吸光度值小于0.5時(shí),表示試劑可能變質(zhì)。
                            • 該試劑盒反應(yīng)溫度為25℃,溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測(cè)吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

                            九、儲(chǔ)藏條件和保質(zhì)期

                            • 儲(chǔ)藏條件:試劑盒于28保存,不要冷凍。
                            •  質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見包裝盒。

                            提示:酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣,酶標(biāo)板仍然正常有效,不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,請(qǐng)放心使用。

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