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                            PPA制備與使用
                            更新時(shí)間:2011-07-05 點(diǎn)擊量:1485

                            PPA制備與使用的基本技術(shù)

                            (1)       將初步純化的SPAHRP用過碘酸鈉氧化法(交聯(lián)反應(yīng)時(shí)間在22℃下5h)交聯(lián)。

                            (2)       將上述PPA溶液過Sephadex G-100柱,條件同前。所收集的第1管至第22管的合并液,是PPA存在的主要組分,可用ELISA塑料平板法檢測(cè)活性。將合并液濃縮,然后加入30%左右甘油,貯于4℃冰箱備用

                                 PPA的使用

                            (1)  PPA-ELISA法。基本上與ELISA法相同,PPA代替了酶標(biāo)抗抗體。在進(jìn)行微量反應(yīng)板測(cè)定時(shí),PPA常常加入0.1ml,稀釋度一般在121100(應(yīng)按不同情況試驗(yàn))。PPAIgG是化學(xué)共價(jià)結(jié)合,反應(yīng)時(shí)間不宜過長(zhǎng),不應(yīng)超過2h,控制在30min-60min,反應(yīng)時(shí)間過長(zhǎng)會(huì)使PPA吸附到塑料載體上去。

                            (2)    PPA進(jìn)行組織內(nèi)有關(guān)抗原的定位。甲醛對(duì)PPA有顯色影響,因此組織不可用甲醛固定,可用甲醛、乙醇等。PPA對(duì)組織內(nèi)抗原(先與IgG結(jié)合)的定位,反應(yīng)時(shí)間可以延長(zhǎng),便于滲透入組織細(xì)胞內(nèi),且沒發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重的物理吸附現(xiàn)象。

                            (3)    PPA實(shí)驗(yàn)中稀釋液常用含0.5%v/vTween200.02mol/L Ph 7.4 Tris-HC1緩沖液(2.42gTris溶于蒸餾水后用0.1N HC1調(diào)pH7.4,然后加蒸餾水定容至1000ml,zui后加0.5ml Tween 20)。

                             

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