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                            ATDC5 小鼠成軟骨細胞
                            更新時間:2020-07-07 點擊量:1924

                            ATDC5 小鼠成軟骨細胞

                            Product Format: a T25 flask

                            Culture Properties貼壁

                            Complete Growth Medium: 89%DMEM/F12+10%FBS+1%雙抗

                            Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

                            Application:  Cells and cancer research

                            NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY.

                             

                            Components  

                            Item

                            Specifications

                            a T25 flask

                            2X106

                            Manual

                            1 copy

                             

                            Operation steps for cell culture

                            • 吸走用于培養(yǎng)基,加入3-5mL PBS后輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細胞;
                            • 吸干凈PBS后加入1mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA,輕輕搖晃培養(yǎng)皿使胰酶浸沒細胞表面,培養(yǎng)瓶放37度培養(yǎng)箱消化;
                              (細胞對于消化比較敏感,消化過度會嚴重影響細胞狀態(tài),導致細胞傳代死亡漂浮或者傳代后不長。細胞消化到細胞間隙變大但未脫落,可以輕輕吹下時即可終止,禁止消化到細胞*漂浮。混勻細胞時盡量輕柔,不要吹出大量氣泡。)
                            • 加入6-8ml*培養(yǎng)基終止消化,輕輕吹下細胞混勻;
                            • 將混勻的細胞1000rpm(約150g)離心3min,棄上清,再用新鮮培養(yǎng)基重懸37度培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng);

                            傳代比例: 不同細胞生長速度不一,具體傳代比例視細胞生長速度而定,大部分細胞適用1:3-1:4傳代,生長較慢的細胞可以1:2傳代。

                            Cell cryopreservation

                            1.凍存液:92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(可以根據實驗室條件自行選擇)

                            2.降溫步驟:4度10min,-20度2h,-80過夜后液氮保存。

                            Tips:

                            • 細胞經過運輸后,部分細胞由于溫度變化及劇烈碰撞si亡破碎形成碎片,是正常現象。貼壁細胞可以消化,懸浮細胞直接混勻收集細胞,900-1000rpm(約150g)離心3min,棄上清。加5ml PBS重懸細胞,再900-1000rpm(約150g)離心3min,用新鮮的*培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)瓶。第二次PBS重懸是為了去除碎片,如果平時碎片比較少,傳代時可以省略PBS重懸的步驟;如果碎片很多,建議PBS多洗次。
                            • 細胞生長不均時,可以將細胞消化吹散后加入新的培養(yǎng)基重新接種或傳代。
                            • 細胞生長緩慢時,可以選擇提高血清濃度培養(yǎng)(gao不超過20%),也可以根據細胞生長狀態(tài),選擇傳代細胞到新的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。

                            不同細胞貼壁性差異比較大,所以消化時間差別較大,20s-10min均有可能,具體以細胞消化到相互分離但未脫落,并可以輕輕吹下為準,嚴禁消化到細胞*漂浮。

                            滬公網安備 31011802001677號

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