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                            過氧化物酶(Peroxidase,POD)試劑盒說明書
                            更新時間:2020-07-15 點擊量:2259

                            貨號:YJS2221                                               規(guī)格:50管/48樣

                            過氧化物酶(Peroxidase,POD)試劑盒說明書

                            可見分光光度法

                            試劑的組成:

                            提取液:液體60mL×1瓶,4保存;

                            試劑一:液體60mL×1瓶,4保存;

                            試劑二:液體×2瓶,4保存;用時每瓶加入5mL試劑一;用不完的試劑4℃保存一周;

                            試劑三:液體10 mL×1瓶,4保存。

                            測定意義:

                            PODEC 1.11.1.7廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,可催化過氧化氫氧化酚類和胺類化合物,具有消除過氧化氫和酚類、胺類毒性的雙重作用。POD催化H2O2氧化特定底物,在470nm有特征光吸收。

                            需自備的儀器和用品:

                            可見分光光度計、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水

                            操作步驟:

                            • 粗酶液提取:
                            • 細菌、細胞或組織樣品的制備:

                            細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細菌或細胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4離心10min,取上清,置冰上待測。

                            組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4離心10min,取上清,置冰上待測。

                            • 血清(漿)樣品:直接檢測。
                            • 測定步驟和加樣表:

                            試劑名稱(µL

                            測定孔

                            樣本

                            15

                            蒸餾水

                            270

                            試劑一

                            520

                            試劑二

                            130

                            試劑三

                            135

                            測定前將試劑一、二和三37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)放置10min。在1mL玻璃比色皿中按順序加入上述試劑,立即混勻并計時,記錄470nm30s時的吸光值A11min30s后的吸光值A2。計算ΔAA2-A1

                             

                            注意:

                            • 若一次性測定樣本較多,可將試劑一、二、三和蒸餾水按比例配成混合液,在37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)放置10min以上,測定時加入15µL樣本和1055µL混合液測定。
                            • 如果ΔA小于0.005,可將反應(yīng)時間延長到5min。如果ΔA大于0.5,可將樣本用提取液稀釋后測定,計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

                            三、POD活性計算:

                            • 血清(漿)POD活性

                            單位定義:每mL血清(漿)在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.01為一個酶活力單位。

                            計算公式:PODU/mL=ΔA×V反總÷V÷0.01÷T =7133×ΔA

                            • 組織、細菌或細胞POD活性
                            • 按樣本蛋白濃度計算

                            單位定義:每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.01為一個酶活力單位。

                            PODU/mg prot)=ΔA×V反總÷V×Cpr÷0.01÷T =7133×ΔA÷Cpr

                            • 按樣本鮮重計算

                            單位定義:每g組織在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.01為一個酶活力單位。

                            PODU/g 鮮重)=ΔA×V反總÷(W× V÷V樣總)÷0.01÷T =7133×ΔA÷W

                            • 按細菌或細胞密度計算

                            單位定義:每1萬個細菌或細胞在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.01為一個酶活力單位。

                            PODU/104 cell)=ΔA×V反總÷(500×V÷V樣總)÷0.01÷T =14.27×ΔA

                            V反總:反應(yīng)體系總體積,1.07mL V樣:加入樣本體積,0.015mLV樣總:加入提取液體積,1 mLT:反應(yīng)時間,1 minCpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mLW:樣本質(zhì)量;500:細菌或細胞總數(shù),500萬。

                             

                             

                            實驗代做服務(wù):

                            ELISA試劑盒免費代檢測

                            CCK8檢測

                            基因組DNA提取

                             

                            蛋白相互作用分析

                            Western Blot

                            免疫組化

                            熒光定量PCR

                            動物模型服務(wù)

                            流式細胞檢測

                            ROS氧化分析

                            激光共聚焦

                            DNA甲基化實驗

                            細胞劃痕

                            鈣離子濃度檢測

                            掃描電鏡實驗

                            microRNA測序

                            動物實驗

                            探針合成

                            ATP/ADP檢測

                            石蠟/冰凍切片

                            定點突變

                            線粒體膜電位(MMP)檢測

                            細胞生長曲線的測定

                            藥理毒理動物實驗

                             

                            免疫共沉淀

                            真核表達載體構(gòu)建

                            染色質(zhì)免疫沉淀CHIP

                            非標(biāo)定量(Label-free)實驗

                            滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

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