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                            BCA蛋白定量試劑盒說明書
                            更新時(shí)間:2020-08-06 點(diǎn)擊量:2359

                            BCA蛋白定量試劑盒說明書

                             

                            BCA Protein Assay Kit

                            BCA蛋白定量試劑盒

                             

                            目錄號(hào):K0014

                             

                             

                            保存條件:BSA標(biāo)準(zhǔn)品2-8℃保存,其它組分室溫保存。

                             

                             

                            組分說明

                             

                                        Cat. No.                             K0014

                                        Kit Size             500 次/微孔,50 次/試管

                                        試劑  A                100 ml

                                        試劑  B                3 ml

                                        BSA 標(biāo)準(zhǔn)品 (2mg/ml)        2 ml

                             

                             

                                           本產(chǎn)品僅供科研使用,請(qǐng)勿用于臨床診斷及其他用途  

                             

                             

                            產(chǎn)品簡(jiǎn)介

                             

                              BCA蛋白定量法是目前廣泛使用的蛋白定量方法之一。本產(chǎn)品是基于  BCA(Bicin

                            -choninic   Acid)法研制而成,實(shí)現(xiàn)了對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行快速、穩(wěn)定、靈敏的濃度測(cè)定。其

                            原理是在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)分子中的肽鏈結(jié)構(gòu)能與Cu2+絡(luò)合生成絡(luò)合物,同時(shí)將Cu2+

                            處原成有高的光吸收Cu+。BCA試劑值,可敏感特異地與顏色的深淺與蛋白Cu結(jié)質(zhì)濃合,形成度成正比,可根據(jù)吸收穩(wěn)定的有顏色的復(fù)值合物。在的大小來562測(cè) 定蛋nm白質(zhì)的含量。本試劑盒含有牛血清白蛋白( BSA)溶液作為蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品溶液,測(cè)定范圍為20~2000 μg/ml。

                             

                            注意事項(xiàng)

                             

                            1.本產(chǎn)品可以采用分光光度計(jì)(試管檢測(cè)法)或者酶標(biāo)儀(微孔檢測(cè)法)測(cè)定蛋白濃度。

                            2.建議每次測(cè)定蛋白樣品時(shí),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,以獲得準(zhǔn)確數(shù)據(jù)。

                            3.BSA標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋液需與待測(cè)樣品的稀釋液一致(可用1×PBS或0.9%生理鹽水進(jìn)行

                               稀釋)。

                            4.完成37℃孵育30分鐘或室溫孵育2小時(shí)后,須在3-5分鐘內(nèi)完成檢測(cè),否則會(huì)影響蛋

                               白定量的準(zhǔn)確度。

                            5.如待測(cè)樣品中含較多的干擾物質(zhì)(具體見附表1),可采用Bradford法蛋白定量試劑

                               盒(K0013)或其他蛋白定量產(chǎn)品。

                             

                            操作步驟

                             

                            1.稀釋BSA標(biāo)準(zhǔn)品:用與待測(cè)蛋白樣品相一致的稀釋液按下表稀釋BSA標(biāo)準(zhǔn)品。

                             

                                                                    

                                                                               

                            管號(hào)      稀釋液用量(μl)  BSA標(biāo)準(zhǔn)品用量(μl)   BSA標(biāo)準(zhǔn)品終濃度(μg/μl)

                                                                                    

                            A                0                100                  2

                            B               200               200                       1

                            C               200         200(從B管中取)               0.5

                            D               200         200(從C管中取)               0.25

                            E               200         200(從D管中取)              0.125

                            F               200         200(從E管中取)              0.0625

                            G               200                0                       0(空白)

                             

                            2.配置BCA工作液:

                               1)計(jì)算BCA工作液總量:                      

                               BCA工作液總量=(BSA標(biāo)準(zhǔn)品樣本個(gè)數(shù)+未知樣本個(gè)數(shù))×復(fù)孔數(shù)×每個(gè)樣本BCA工作液體積

                               舉例:BSA標(biāo)準(zhǔn)品樣本個(gè)數(shù)為7個(gè),未知樣本個(gè)數(shù)2個(gè),復(fù)孔數(shù)3個(gè)。

                             

                               試管檢測(cè)法:

                             

                               BCA工作液總量=(7個(gè)BSA標(biāo)準(zhǔn)品樣本+2個(gè)未知樣本)×3個(gè)復(fù)孔×2 ml/每個(gè)樣本工作液體積=54 ml

                               微孔檢測(cè)法:

                             

                               BCA工作液總量=(7個(gè)BSA標(biāo)準(zhǔn)品樣本+2個(gè)未知樣本)×3個(gè)復(fù)孔×200 μl/每個(gè)樣本工作液體積=5.4ml

                               2)根據(jù)計(jì)算出的BCA工作液需要總量,將試劑A和試劑B按照50:1的體積比,配制

                               BCA工作液,充分混勻。

                             

                               注意:1)由于加樣可能存在誤差,建議配制BCA工作液時(shí),多配制1-2個(gè)孔。

                               2)新配制的BCA工作液室溫密封條件下可穩(wěn)定保存24小時(shí)。

                            3.定量檢測(cè)

                            3a.試管檢測(cè)法(蛋白濃度檢測(cè)范圍:20-2000 μg/ml)

                               1)按上表,將稀釋好的A-G BSA標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)蛋白樣品(原液或稀釋液)各100 μl

                               分別加到作好標(biāo)記的試管中。推薦每個(gè)測(cè)定的樣本做2-3個(gè)平行反應(yīng)。

                               2)向每個(gè)試管中各加入2 ml BCA工作液,充分混勻,37℃水浴中孵育30分鐘或室

                               溫孵育2小時(shí)。

                               3)將各管冷卻至室溫。

                               4)用分光光度計(jì)在562 nm處測(cè)定每個(gè)樣品及BSA標(biāo)準(zhǔn)品的吸光值,同時(shí)做好記錄。

                               5)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算樣品中的蛋白濃度。

                            3b.微孔檢測(cè)法(蛋白濃度檢測(cè)范圍:20-2000 μg/ml)

                               1)按上表,將稀釋好的A-G BSA標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)蛋白樣品(原液或稀釋液)各25 μl分

                               別加到作好標(biāo)記的96孔板微孔中。推薦每個(gè)測(cè)定的樣本做2-3個(gè)平行反應(yīng)。

                               2)每孔加入200 μl BCA工作液,充分混勻,蓋上96孔板蓋,37℃孵育30分鐘。

                               3)冷卻至室溫。

                               4)用酶標(biāo)儀在540-590 nm范圍內(nèi),測(cè)定每個(gè)樣品及BSA標(biāo)準(zhǔn)品吸光值,做好記錄。

                               5)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算樣品中的蛋白濃度。

                             

                               注意:1)BCA法測(cè)定蛋白濃度時(shí),吸光值會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)不斷加深。因此所有樣品測(cè)定需在3-5 分鐘內(nèi)完成,否則會(huì)影響蛋白定量的準(zhǔn)確度。

                             

                               2)建議以去除背景值后的吸光值讀數(shù)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

                             

                               3)由于操作誤差導(dǎo)致標(biāo)準(zhǔn)品讀數(shù)嚴(yán)重偏離線性曲線的應(yīng)舍去。

                             

                               4)未知樣品濃度可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線方程中計(jì)算得出, 實(shí)際濃度需要乘以樣品的稀釋倍數(shù)。

                               5)如果得到的蛋白濃度不在檢測(cè)范圍內(nèi),請(qǐng)重新稀釋樣品后再次測(cè)定。

                             

                                4.BCA蛋白定量分析結(jié)果舉例:

                             

                             

                            實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

                            ELISA試劑盒免費(fèi)代檢測(cè)

                            CCK8檢測(cè)

                            HE染色

                            蛋白相互作用分析

                            Western Blot

                            免疫組化IHC染色

                            熒光定量PCR

                            動(dòng)物模型服務(wù)

                            流式細(xì)胞檢測(cè)

                            免疫熒光染色

                            激光共聚焦

                            DNA甲基化實(shí)驗(yàn)

                            石蠟/冰凍切片

                            透射電鏡服務(wù)

                            掃描電鏡實(shí)驗(yàn)

                            蛋白雙向(2-D)

                            動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

                            免疫共沉淀

                            原位雜交(FIsh)

                            蛋白質(zhì)純化

                            分子克隆和質(zhì)粒載體構(gòu)建服務(wù)

                            組蛋白甲基化磷酸化乙酰化

                             

                            蛋白雙向2D-WB

                             

                            藥理毒理動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

                             

                            番紅O固綠染色

                            明膠酶譜MMP

                            酶活性檢測(cè)

                            動(dòng)物造模/模型實(shí)驗(yàn)服務(wù)

                            滬公網(wǎng)安備 31011802001677號(hào)

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