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                            Nc-細胞核/漿蛋白抽提試劑盒說明書
                            更新時間:2020-08-17 點擊量:1339

                                                                                                                                                

                            Nc-細胞核/漿蛋白抽提試劑盒說明書

                             

                            Nuclear and Cytoplasmic Extraction Kit

                            目錄號:K0199   

                            保存:蛋白酶抑制劑混合物:-20℃

                               其它組分:2                   - 8  度    

                             

                            組分說明

                             

                            Catalog no.               K0199B

                            Kit Size                   50 次

                            Nc-試劑   A                   50 ml

                            Nc-試劑    B                  3 ml

                             

                            Nc-試劑   C                   25 ml

                            蛋白酶抑制劑混合物                       750  μl

                             

                             

                             

                            產(chǎn)品簡介

                             

                                Nc-細胞核/漿蛋白抽提試劑盒能夠簡單、快速的提取來源于哺乳動物細胞及組織的細胞核和細胞漿蛋白,所提取蛋白保持生物學活性。本試劑盒首先通過細胞漿蛋白抽提試劑裂解細胞膜,釋放細胞漿蛋白,然后通過離心得到細胞核沉淀。

                            后通過細胞核蛋白抽提試劑抽提得到細胞核蛋白。抽提獲得的核蛋白及漿蛋白純度高,有效避免核/漿蛋白的交叉污染,可以用于Western、Gel Shift、報告基因檢測以及酶活力測定等后續(xù)操作。

                             

                            注意事項

                            1. 如需提取磷酸化蛋白請在抽提試劑中加入磷酸酶抑制劑。

                            2. 所有樣品操作請置于冰上進行。

                            3. 可根據(jù)具體實驗情況調整試劑用量,保證各試劑使用比例為                               Nc-試劑   A:Nc-試劑     B:Nc-試劑     C=100:5.5:50。

                            4. 可以采用更高的速度來離心。

                            5. 戴手套操作。                                                                                                                                                                

                             

                            操作步驟        

                            l    細胞中胞漿、胞核蛋白的提取

                             1.  收集細胞,計數(shù)。

                             2.  請在蛋白抽提前取出抽提試劑Nc-試劑A和Nc-試劑C進行預冷,按照1:99比例加入蛋白酶抑制劑混合物(例如990μ抽提試劑中加入10μl蛋白酶抑制劑混合物),使蛋白酶抑制劑混合物在抽提試劑中成1×工作液。

                                 注意:在進行蛋白抽提前2-3分鐘內加入蛋白酶抑制劑混合物。

                             3.  1×107細胞中加入1 ml Nc-試劑A(使用前加入蛋白酶抑制劑混合物),                   渦旋5秒以充分混勻,冰上孵育20分鐘。

                                注意:各種細胞的特性不同,需要根據(jù)不同細胞的特性調整Nc-試劑A的用量,如果蛋白濃度小,按比例減少Nc-試劑A及后續(xù)Nc-試劑B、Nc-試劑C的用量。

                             4.  加入55    μl Nc-試劑    B,渦旋5秒以充分混勻,冰上孵育1分鐘。

                             5.  4℃  12,000 rpm(13,400×g)離心15分鐘,收集上清(盡量收集干凈上清液)至另一離心管中,-20℃保存待測(此提取液為胞漿蛋白)。

                             6.  向上步所得的沉淀中加入500μl Nc-試劑C(使用前加入蛋白酶抑制劑混合物),                      渦旋5秒以充分混勻,重懸沉淀,冰上孵育40分鐘,每隔10分鐘渦旋混勻一次,每次約15-30秒。

                             7.  4℃  12,000 rpm離心15分鐘,收集上清(盡量收集干凈上清液)至另一離心管中,-20℃保存待測(此提取液為胞核蛋白)。 組織中胞漿、胞核蛋白的提取

                             1. 取材,保存組織。

                             2. 請在蛋白抽提前取出抽提試劑Nc-試劑A和Nc-試劑C進行預冷,按照1:99比例加入蛋白酶抑制劑混合物(例如990μl抽提試劑中加入10μl蛋白酶抑制劑混合物),使蛋白酶抑制劑混合物在抽提試劑中成1×工作液。

                                 注意:在進行蛋白抽提前2-3分鐘內加入蛋白酶抑制劑混合物。

                             3. 稱組織重量,每100 mg組織中加入1 ml Nc-試劑A(使用前加入蛋白酶抑制劑混合物),用勻漿器在冰上充分勻漿,

                                放置在冰上孵育20分鐘。

                                注意:各種組織的特性不同,需要根據(jù)不同組織調整Nc-試劑A的用量,如果蛋白濃度小,按比例減少Nc-試劑A及后續(xù)Nc-試劑B、Nc-試劑C

                            的用量。

                             4. 加入55μl Nc-試劑B,渦旋5秒以充分混勻,放置在冰上孵育                        1分鐘。

                             5.  4℃12,000 rpm(13,400×g)離心15分鐘,收集上清(盡量收集干凈上清液)至另一離心管中,-20℃保存待測(此提取液為胞漿蛋白)。

                             6. 向上步所得的沉淀中加入500μl Nc-試劑C(使用前加入蛋白酶抑制劑混合物),                      渦旋5秒以充分混勻,重懸沉淀,冰上孵育40分鐘,每隔10分鐘渦旋混勻一次,每次約15-30秒。

                             7.  4℃12,000 rpm離心15分鐘,收集上清(盡量收集干凈上清液)至另一離心管中,-20℃保存待測(此提取液為胞核蛋白)。

                             

                             

                            實驗代做服務:

                            ELISA試劑盒免費代檢測

                            CCK8檢測

                            HE染色

                            蛋白相互作用分析

                            Western Blot

                            免疫組化IHC染色

                            熒光定量PCR

                            動物模型服務

                            流式細胞檢測

                            免疫熒光染色

                            激光共聚焦

                            DNA甲基化實驗

                            石蠟/冰凍切片

                            透射電鏡服務

                            掃描電鏡實驗

                            蛋白雙向(2-D)

                            動物實驗

                            免疫共沉淀

                            原位雜交(FIsh)

                            蛋白質純化

                            分子克隆和質粒載體構建服務

                            組蛋白甲基化磷酸化乙酰化

                             

                            蛋白雙向2D-WB

                             

                            藥理毒理動物實驗

                             

                            番紅O固綠染色

                            明膠酶譜MMP

                            酶活性檢測

                            動物造模/模型實驗服務

                             

                                                                                                                                                   

                            滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

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