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                            網(wǎng)站首頁技術(shù)中心 > 超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒說明書
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                            超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒說明書
                            更新時間:2020-09-04 點擊量:2346

                            超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)試劑盒說明書

                            可見分光光度法

                            測定意義:

                             

                            SODEC 1.15.1.1廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中催化超氧化物陰離子 發(fā)生岐化作用生成 H2O2 和 O2SOD 不僅是超氧化物陰離子清除酶也是 H2O2 主要生成 酶在生物抗氧化系統(tǒng)中具有重要作用。

                             

                            測定原理:

                             

                            通過黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應(yīng)系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子(O2-.)O2-.可還原氮藍(lán)四唑生成藍(lán)色甲臜后者在 560nm 處有吸收SOD 可清除 O2-.從而抑制了甲臜的形成反應(yīng)液藍(lán)色越深 說明 SOD 活性愈低反之活性越高。

                             

                            需自備的儀器和用品:

                             

                            可見分光光度計、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水

                             

                            試劑的組成和配制:

                             

                            提取液:60mL×1 瓶,4℃保存;

                            試劑一:15mL×1 瓶,4℃保存;

                             

                            試劑二:粉劑×1 瓶,4℃保存,用時加入27ml蒸餾水,充分搖勻懸濁液;

                            試劑三液體 175μL×1 支4℃保存(與蒸餾水1:1稀釋再使用)

                             

                            試劑四液體 10mL×1 瓶4℃保存。

                             

                            粗酶液提取:

                             

                            1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備: 細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次); 8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

                            2、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織, 加入 1mL 提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

                            3、血清(漿)樣品:直接檢測。

                             

                            測定步驟

                             

                            1、分光光度計預(yù)熱 30min 以上調(diào)節(jié)波長至 560nm蒸餾水調(diào)零。

                             

                            2、測定前將試劑一、二和四 37哺乳動物25其他物種水浴 5min 以上。

                            3、樣本測定EP 管中依次加入下列試劑):

                             

                             

                             

                             

                             

                             

                             

                             

                             

                             

                             

                            試劑名稱μL

                            測定管

                            對照管

                             

                             

                             

                            試劑一

                            240

                            240

                             

                             

                             

                            試劑二

                            510

                            510

                             

                             

                             

                            試劑三

                            6

                            6

                             

                             

                             

                            樣本

                            90

                             

                             

                             

                             

                            試劑四

                            180

                            180

                             

                             

                             

                            蒸餾水

                             

                            90

                             

                             

                             

                             

                            充分混勻室溫靜置 30min 后加入 1mL 玻璃比色皿560nm 處測定各管吸光值 A

                            注意事項:

                             

                            1、試劑三為酶不可冷凍使用時在冰上放置。

                             

                            2、對照管只需要做一管。

                             

                            SOD 活性計算:

                             

                            1、抑制百分率的計算

                             

                            抑制百分率(A 對照管A 測定管) ÷A 對照管× 100%

                             

                            盡量使樣本的抑制百分率在 30-70%范圍內(nèi)。如果計算出來的抑制百分率小于 30%或大于 70%則通常需要調(diào)整加樣量后重新測定。如果測定出來的抑制百分率偏高則需將樣本用 提取液適當(dāng)稀釋如果測定出來的抑制百分率偏低則需重新準(zhǔn)備濃度比較高的待測樣本。 2SOD 酶活性單位在上述黃嘌呤氧化酶藕聯(lián)反應(yīng)體系中抑制百分率為 50%反應(yīng)體系 中的 SOD 酶活力定義為一個酶活力單位(U/mL)

                             

                            3SOD 酶活性計算

                             

                            (1)血清(漿)SOD 活性(U/mL)=[抑制百分率÷(1抑制百分率)×V 反總]÷V ×樣本稀釋倍數(shù)=11.4×抑制百分率÷(1抑制百分率樣本稀釋倍數(shù)

                             

                            (2)組織、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞 SOD 活力計算:

                            a.按樣本蛋白濃度計算

                             

                            SOD 活性(U/mg prot)=[抑制百分率÷(1抑制百分率)×V 反總]÷(V ×Cpr)×樣本稀釋倍數(shù)

                             

                            =11.4×抑制百分率÷(1抑制百分率)÷Cpr×樣本稀釋倍數(shù) 需要另外測定建議使用本公司 BCA 蛋白質(zhì)含量測定試劑盒。

                            b.按樣本鮮重計算

                             

                            SOD 活性(U/g 鮮重)=[抑制百分率÷(1抑制百分率)×V 反總]÷(W×V ÷V 樣總樣本稀釋 倍數(shù)=11.4×抑制百分率÷(1抑制百分率)÷W×樣本稀釋倍數(shù)

                             

                            c.按細(xì)菌或細(xì)胞個數(shù)計算

                             

                            SOD 活力(U/104 cell)=[抑制百分率÷(1抑制百分率) ×V 反總]÷(500×V ÷V 樣總樣本稀釋 倍數(shù)=0.0228×抑制百分率÷(1抑制百分率樣本稀釋倍數(shù)

                             

                            V 反總反應(yīng)體系總體積1.026mLV 加入反應(yīng)體系中樣本體積0.09mLV 樣總 加入提取液體積1 mLCpr樣本蛋白質(zhì)濃度mg/mL W樣本質(zhì)量g500細(xì)胞或 細(xì)菌總數(shù)500 萬

                             

                            實驗代做服務(wù):

                            ELISA試劑盒免費代檢測

                            CCK8檢測

                            HE染色

                            蛋白相互作用分析

                            Western Blot

                            免疫組化IHC染色

                            熒光定量PCR

                            動物模型服務(wù)

                            流式細(xì)胞檢測

                            免疫熒光染色

                            激光共聚焦

                            DNA甲基化實驗

                            石蠟/冰凍切片

                            透射電鏡服務(wù)

                            掃描電鏡實驗

                            蛋白雙向(2-D)

                            動物實驗

                            免疫共沉淀

                            原位雜交(FIsh)

                            蛋白質(zhì)純化

                            分子克隆和質(zhì)粒載體構(gòu)建服務(wù)

                            組蛋白甲基化磷酸化乙酰化

                             

                            蛋白雙向2D-WB

                             

                            藥理毒理動物實驗

                             

                            番紅O固綠染色

                            明膠酶譜MMP

                            酶活性檢測

                            動物造模/模型實驗服務(wù)

                            滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

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