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                            鏈霉素快速檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書
                            更新時(shí)間:2020-12-08 點(diǎn)擊量:1462

                            鏈霉素

                            快速檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書

                            一、原理

                            本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法,在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物鏈霉素將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗鏈霉素抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光值與其所含殘留物鏈霉素的含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物鏈霉素的含量。

                            二、試劑盒特性

                            • 試劑盒靈敏度:   0.1ppb
                            • 孵育溫度:       37
                            • 孵育時(shí)間:       30min30min15min
                            • 樣本檢測(cè)下限

                              ··············································  1 ppb

                            雞肝、牛奶 ······································  4 ppb

                             /蜂王漿 ···································  2 ppb

                            • 交叉反應(yīng)率

                            鏈霉素  ··········································   100%

                            慶大霉素  ······································· 0.1%

                            雙氫鏈霉素  ····································  108%

                            卡那霉素  ······································· 0.1%

                            • 樣本回收率

                                  ····································  85±22%

                            雞肉組織  ····································  80±22%

                            蜂蜜/蜂王漿   ······························  75±22%

                            三、試劑盒組成

                            1

                            微量測(cè)試孔

                            每條8孔,一板12條

                            2

                            標(biāo)準(zhǔn)液×6瓶

                            (1ml/瓶)

                            0ppb

                            0.1ppb

                            0.4ppb

                            1.6ppb

                            6.4ppb

                            25.6ppb

                            3

                            酶標(biāo)記物

                            12ml

                            紅色帽

                            4

                            抗體工作液

                            7ml

                            藍(lán)色帽

                            5

                            底物A液

                            7ml

                            白色帽

                            6

                            底物B液

                            7ml

                            黑色帽

                            7

                            終止液

                            7ml

                            黃色帽

                            8

                            20X濃縮洗滌液

                            40ml

                            白色帽

                            9

                            10X濃縮復(fù)溶液

                            50ml

                            透明帽

                            四、所用儀器、試劑

                            具備的儀器:酶標(biāo)儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平(感量0.01g)、恒溫箱、恒溫水浴鍋

                            微量移液器:?jiǎn)蔚?/span> 20200µl、單道1001000µl、多道 30300 µl

                                  劑:氫氧化鈉、乙腈、正己烷、三氯yi

                            五、樣本前處理步驟

                            • 樣本處理前須知

                            a)實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭,吸取不同試劑時(shí)要更換吸頭。

                            b)實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈,必要時(shí)可對(duì)實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔,以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

                            • 樣本前處理需配制:

                            配液1  0.5%三氯yi酸溶液

                            0.5g三氯乙suan加去離子水定容100ml

                            配液2  3%三氯乙suan溶液

                            3g三氯乙suan加去離子水定容100ml

                            配液3  1M NaOH溶液:

                            4g NaOH加去離子水定容至100ml

                            配液4  0.1M NaOH溶液:

                            0.4g NaOH加去離子水定容至100ml

                            配液5  樣本復(fù)溶液:

                            10X濃縮復(fù)溶液用去離子水19稀釋。

                            • 樣本處理:

                            a)牛奶處理方法

                            • 取牛奶1ml,按1:39稀釋,混合30s。(50µl牛奶+1950µl樣本復(fù)溶液)
                            • 50µl用于分析。

                            樣本稀釋倍數(shù):  40 

                            b)雞肉處理方法

                            • 2±0.05g去除脂肪的勻漿樣本,4ml 3%三氯yi酸,充分混勻2min 室溫4000r/min以上,離心10min
                            • 取上清液100µl,加入100µl0.1M NaOH,再加入300 µl樣本復(fù)溶液,充分混勻;
                            • 50µl用于分析。

                            樣本稀釋倍數(shù):  10 

                            c)雞肝處理方法

                            • 2±0.05g去除脂肪的勻漿樣本,6ml 0.5%三氯yi酸和2ml乙腈,充分混勻5min
                            • 室溫4000r/min以上,離心10min
                            • 2ml上清液加入2ml正己烷,充分混勻靜置3min,取0.5ml下層清亮液體,室溫4000r/min以上,離心5min
                            • 50µl下層清亮液(若有分層,須去除掉上層液體取下層清亮液體),加入450µl樣本復(fù)溶液混勻,混合30s
                            • 50µl用于分析。

                                樣本稀釋倍數(shù):  40

                            d)蜂蜜、蜂王漿處理方法

                            • 稱量1±0.05g 樣本加入2ml 去離子水,振蕩至*溶解;
                            • 室溫4000r/min以上離心10 min。
                            • 100µl上清液,加入400µl樣本復(fù)溶液混勻,混合30s
                            • 50µl用于分析。

                            樣本稀釋倍數(shù): 10 

                            六、 酶標(biāo)免疫分析程序:

                            • 測(cè)定前應(yīng)須知:
                            • 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫(2025)。
                            • 使用之后立即將所有試劑放回28
                            • ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性,正確的洗板操作是ELISA測(cè)定程序中的要點(diǎn)。
                            • 所有恒溫孵育過(guò)程,避免光線照射,用蓋板膜蓋住微孔板。
                            • 操作步驟:
                            • 28冷藏環(huán)境中取出所需試劑,室溫(2025)平衡30min以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
                            • 取出框架及需要數(shù)量的微孔,將不用的微孔放入自封袋,保存于2-8
                            • 配液:將40ml濃縮洗滌液(20倍濃縮)用去離子水按照1:19稀釋(1份濃縮洗滌液+19份去離子水),或按所需用量配制洗滌液
                            • 編號(hào):將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
                            • 加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50µl /孔,然后加入抗體工作液50µl/孔,用蓋板膜封板,37℃環(huán)境中反應(yīng)30min
                            • 倒出孔中液體,將酶標(biāo)板倒置在吸水紙上拍打,去除孔中液體。加入250µl/孔洗滌液,15-30s后倒出孔中液體,用吸水紙拍干,如此重復(fù)操作共洗板5次。
                            • 酶標(biāo)記物:加入酶標(biāo)記物100µl/孔,用蓋板膜封板,37℃環(huán)境中反應(yīng)30min。取出酶標(biāo)板,如前述洗板5次。
                            • 顯色:每孔加入底物A50µl,再加底物B50µl,輕輕振蕩混勻,37環(huán)境中避光顯色15min
                            • 測(cè)定:加入終止液50µl/孔,輕輕振蕩混勻,設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處(建議用雙波長(zhǎng)450/630nm檢測(cè),5min內(nèi)讀數(shù)),測(cè)定每孔OD值。

                            七、結(jié)果判定

                            結(jié)果判定有兩種方法,粗略判定可用第1種方法,定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含鏈霉素量成負(fù)相關(guān)。

                            1、粗略判定:

                            用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.3,樣本2的吸光度值為1.0,標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是:0ppb2.243 0.1ppb1.8160.4ppb1.4151.6ppb0.746.4ppb0.31325.6ppb0.155。則樣本1的濃度范圍是6.4ppb25.6ppb;樣本2的濃度范圍是0.4ppb1.6ppb,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中鏈霉素實(shí)際濃度。

                            2、定量分析

                            1)百分吸光率的計(jì)算,標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的吸光度值的平均值(雙孔)除以第-個(gè)標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值,再乘以100%,即

                            百分吸光%)=

                            B

                            ×100%

                            B0

                            B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值

                            B0—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

                            2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算

                            以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),以鏈霉素標(biāo)準(zhǔn)品濃ng/ml)的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中鏈霉素實(shí)際濃度。

                            若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。

                            八、 注意事項(xiàng)

                            • 室溫低于25或試劑及標(biāo)本未回到室溫(2025)會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
                            • 在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會(huì)伴隨著標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
                            • 混合要均勻,否則會(huì)出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。
                            • 反應(yīng)終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。
                            • 不要使用過(guò)了有效日期的試劑盒;稀釋或攙雜使用會(huì)引起靈敏度、OD值變化;不要交換使用不同批號(hào)的盒中試劑。
                            • 不用的微孔板放進(jìn)自封袋重新密封;標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無(wú)色的發(fā)色劑對(duì)光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。
                            • 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。標(biāo)準(zhǔn)品1的吸光度值小于0.5時(shí),表示試劑可能變質(zhì)。
                            • 該試劑盒jia反應(yīng)溫度為37,溫度過(guò)高或過(guò)低將導(dǎo)致檢測(cè)吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

                            九、儲(chǔ)藏條件和保質(zhì)期

                            • 儲(chǔ)藏條件:試劑盒于28保存,不要冷凍。
                            •  質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見(jiàn)包裝盒。

                            提示:酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣,酶標(biāo)板仍然正常有效,不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,請(qǐng)放心使用。

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                            滬公網(wǎng)安備 31011802001677號(hào)

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