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                            組織/細(xì)胞RNA快速提取試中DNA微量殘留處理技巧
                            更新時(shí)間:2021-01-27 點(diǎn)擊量:3409

                            EASYspin 組織/細(xì)胞RNA快速提取試劑盒
                            EASYspin RNA Rapid Tissue and cell Kit

                            保存條件:本試劑盒在室溫儲(chǔ)存 12 個(gè)月不影響使用效果。

                            產(chǎn)品介紹:

                            *的裂解液/β-巰基乙醇迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞 RNA 酶,然后用乙醇調(diào)節(jié)結(jié)
                            合條件后,RNA 在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜, 再通過(guò)一系列快速的漂洗-離心的步驟, 去蛋白液和漂洗液將細(xì)胞代謝物,蛋白等雜質(zhì)去除,后低鹽的 RNase free H20 將純凈 RNA 從硅基質(zhì)膜上洗脫。
                            自備試劑:乙醇, β-巰基乙醇注意事項(xiàng):
                            1.需要自備一次性注射器,研缽。RA105 EASYspin  組織 細(xì)胞RNA快速提取試劑盒-MBI2.裂解液RLT 和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物,操作時(shí)要戴乳膠手套,避免沾染皮膚,眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時(shí),要用大量清水或者生理鹽水沖洗。

                            3.關(guān)于DNA的微量殘留:
                            一般說(shuō)來(lái)任何總RNA 提取試劑在提取過(guò)程中無(wú)法*避免DNA 的微量殘留,本公司的EASYspin 系列RNA提取產(chǎn)品,在大多數(shù) RT-PCR 擴(kuò)增過(guò)程中極其微量的DNA 殘留(一般電泳 EB 染色紫外燈下觀察不可見(jiàn))影響不是很大, 如果要進(jìn)行嚴(yán)格的
                            mRNA 表達(dá)量分析如熒光定量 PCR,我們建議在進(jìn)行模板和引物的選擇時(shí):
                            1)選用跨內(nèi)含子的引物,以穿過(guò) mRNA 中的連接區(qū),這樣 DNA 就不能作為模板參與擴(kuò)增反應(yīng)。
                            2)選擇基因組DNA 和 cDNA 上擴(kuò)增的產(chǎn)物大小不一樣的引物對(duì)。
                            操作步驟
                            提示:
                             第--次使用前請(qǐng)先在漂洗液 RW 瓶和 70%乙醇瓶中加入指*&定量無(wú)水乙醇!
                             操作前在裂解液RLT 中加入β-巰基乙醇至終濃度 1%,如 1 ml RLT中加入10μl β-巰基乙醇。此裂解液建議現(xiàn)用現(xiàn)配。配好的 RLT 4℃可放置一個(gè)月。
                            1.組織培養(yǎng)細(xì)胞
                            a.收集<107 懸浮細(xì)胞到一個(gè) 1.5ml 離心管,對(duì)于貼壁細(xì)胞,孔板培養(yǎng)可以直接裂解, 細(xì)胞瓶培養(yǎng)應(yīng)該先用胰蛋白酶消化后吹打下來(lái)收集。
                            b.2,000rpm 離心 10 sec(或者 300g 離心 5 min),使細(xì)胞沉淀下來(lái)。*吸棄上清,留下細(xì)胞團(tuán),注意不*棄上清會(huì)稀釋裂解液導(dǎo)致產(chǎn)量純度降低。
                            c.輕彈管壁將細(xì)胞沉淀*松散重懸, 加入 350μl(<5x106 細(xì)胞) 或者 600μl
                            (5x106-1x107 細(xì)胞)裂解液RLT,吹打混勻后用手劇烈振蕩 20 sec,充分裂解。
                            d.用帶鈍針頭的一次性 1ml(配 0.9mm 針頭) 注射器抽打裂解物 5-10 次或直到得到滿意勻漿結(jié)果(或者電動(dòng)勻漿 30 sec),可以剪切 DNA,降低粘稠度和提高產(chǎn)量。
                            e.接操作步驟項(xiàng)下 3。
                            2.動(dòng)物組織(例如鼠肝腦)
                            a.電動(dòng)勻漿: 新鮮組織用解剖刀迅速切成小碎塊, 加入 350μl(<20mg 組織) 或者600μl(20-30mg 組織)的裂解液RLT 后電動(dòng)*勻漿 20-40 sec。
                            b.液氮研磨+勻漿:在液氮中研磨組織成細(xì)粉后,取適量組織細(xì)粉(20mg/30mg)轉(zhuǎn)入 裝有 350μl/600μl 組織裂解液 RLT 的 1.5ml 離心管中,  用手劇烈振蕩 20 sec,充分裂解。用帶鈍針頭的一次性 1 ml(配 0.9mm 針頭)  注射器抽打裂解物 10  次或直到得到滿意勻漿結(jié)果(或者電動(dòng)勻漿30 sec),可以剪切DNA,降低粘稠度和提高產(chǎn)量。
                            c.將勻漿后裂解物 12,000rpm 離心3 min,沉淀可能存在的裂解困難的碎片或者不溶物,將裂解物上清小心轉(zhuǎn)到一個(gè)新離心管。

                            d.接操作步驟項(xiàng)下 3。
                            3.較精~*確估計(jì)裂解物(上清)體積,加入等體積的 70%乙醇(請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇!),此時(shí)可能出現(xiàn)沉淀,但是不影響提取過(guò)程,立即吹打混勻,不要離心。
                            4.立刻將混合物(每次小于 700μl,多可以分兩次加入)加入一個(gè)吸附柱 RA 中,(吸附柱放入收集管中)12,000rpm 離心 60 sec,棄掉廢液。
                            5.加 350μl 去蛋白液 RW1,室溫放置 30 sec,12,000rpm 離心 30 sec,棄掉廢液。將吸附柱 RA 放回收集管中。
                            6.DNaseI 工作液的配制:取 10μl DNaseI 儲(chǔ)存液放入新的 RNase-free 離心管中,加入70μl RDD 溶液,輕柔混勻。
                            7.向吸附柱 RA 中央加入 80μl DNaseI 工作液,室溫放置 15 min(一般情況下室溫放置可得到較好的消化效果,如果室溫效果不佳可選擇在 37℃放置 15 min)。
                            8.加 350μl 去蛋白液 RW1,室溫放置 30 sec,12,000rpm 離心 30 sec,棄掉廢液。將吸附柱 RA 放回收集管中。
                            9.加入 500μl 漂洗液 RW(請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇!),12,000rpm  離心 30 sec,棄掉廢液。加入 500μl 漂洗液 RW,重復(fù)一遍。
                            10.將吸附柱 RA 放回空收集管中,12,000rpm 離心 2 min,將吸附柱置于室溫放置數(shù)分鐘,以*晾干吸附材料中殘余的漂洗液。
                            11.取出吸附柱 RA,放入一個(gè) RNase free 離心管中,根據(jù)預(yù)期 RNA 產(chǎn)量在吸附膜的中間部位加30-50μl RNase free wate(r  事先在65℃水浴中加熱效果更好),室溫放置1 min,12,000rpm 離心 1 min。

                             

                             

                            實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

                            ELISA試劑盒免費(fèi)代檢測(cè)

                            CCK8檢測(cè)

                            HE染色

                            蛋白相互作用分析

                            Western Blot

                            免疫組化IHC染色

                            熒光定量PCR

                            動(dòng)物模型服務(wù)

                            流式細(xì)胞檢測(cè)

                            免疫熒光染色

                            激光共聚焦

                            DNA甲基化實(shí)驗(yàn)

                            石蠟/冰凍切片

                            透射電鏡服務(wù)

                            掃描電鏡實(shí)驗(yàn)

                            蛋白雙向(2-D)

                            動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

                            免疫共沉淀

                            原位雜交(FIsh)

                            蛋白質(zhì)純化

                            分子克隆和質(zhì)粒載體構(gòu)建服務(wù)

                            組蛋白甲基化磷酸化乙酰化

                             

                            蛋白雙向2D-WB

                             

                            藥理毒理動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

                             

                            番紅O固綠染色

                            明膠酶譜MMP

                            酶活性檢測(cè)

                            動(dòng)物造模/模型實(shí)驗(yàn)服務(wù)

                            滬公網(wǎng)安備 31011802001677號(hào)

                            日韩色综合_久久久久久精品国产观看2010_日本视频精品_久久精品国产亚洲av夜色九虎_来一水AV@lysav

                                  
                                  

                                      
                                      

                                                
                                                

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