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                            人神經上皮瘤細胞細胞(SK-N-MC)培養(yǎng)說明書
                            更新時間:2021-04-08 點擊量:1461

                            人神經上皮瘤細胞細胞(SK-N-MC)培養(yǎng)說明書

                             

                            細胞介紹

                            這株細胞與HTB-11都是神經源的。19719月分離得到SK-N-MC后,發(fā)現(xiàn)它有中性多巴胺-β-羥化酶活性,也有細胞內兒茶酚胺,用甲醛可以誘導出熒光。

                             

                            細胞特性

                            1) 來源:腦;眼眶上區(qū)神經上皮瘤轉移灶

                            2) 形態(tài)上皮細胞

                            3) 含量:>1x106 /mL

                            4) 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

                            5) 規(guī)格:T75或者1mL凍存管包裝

                             

                            運輸和保存:使用含有優(yōu)質胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細胞。收到細胞后,1000RPM常溫條件離心5min潔凈操作臺棄去上清,加入推薦使用的培養(yǎng)基轉移至10cm培養(yǎng)皿或者T75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

                             

                            細胞用途:僅供科研使用。

                                                   

                            細胞培養(yǎng)步驟

                            一.培養(yǎng)基培養(yǎng)凍存條件準備:

                            1) 準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)90%;優(yōu)質胎牛血清,10%

                            2) 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度培養(yǎng)箱濕度為70%-80%

                            3) 凍存液90%*培養(yǎng)基,10%DMSO現(xiàn)用現(xiàn)液氮儲存。

                            二. 細胞處理

                            1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中加入8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

                            2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%可進行傳代培養(yǎng)

                            對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

                            1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子PBS潤洗細胞1-2

                            2. 2ml消化液0.25%Trypsin-0.53mM EDTA培養(yǎng)瓶中,置于37培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化

                            3. 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

                            4. 將細胞懸液按1215的比例分到新的8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中

                            3)細胞凍存:細胞生長狀態(tài)良好時,進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO進行凍存

                             

                            注意事項:

                            1. 收到細胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系

                            2. 所有動物細胞均視為潛在的生物危害性必須在二級生物安全內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

                             

                             

                            實驗代做服務:

                            ELISA試劑盒免費代檢測

                            CCK8檢測

                            HE染色

                            蛋白相互作用分析

                            Western Blot

                            免疫組化IHC染色

                            熒光定量PCR

                            動物模型服務

                            流式細胞檢測

                            免疫熒光染色

                            激光共聚焦

                            DNA甲基化實驗

                            石蠟/冰凍切片

                            透射電鏡服務

                            掃描電鏡實驗

                            蛋白雙向(2-D)

                            動物實驗

                            免疫共沉淀

                            原位雜交(FIsh

                            蛋白質純化

                            分子克隆和質粒載體構建服務

                            組蛋白甲基化磷酸化乙酰化

                             

                            蛋白雙向2D-WB

                             

                            藥理毒理動物實驗

                             

                            番紅O固綠染色

                            明膠酶譜MMP

                            酶活性檢測

                            動物造模/模型實驗服務

                            滬公網安備 31011802001677號

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