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                            網(wǎng)站首頁技術(shù)中心 > 人膽管癌細胞(TFK1)培養(yǎng)說明書
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                            人膽管癌細胞(TFK1)培養(yǎng)說明書
                            更新時間:2021-04-28 點擊量:1729

                            人膽管癌細胞(TFK1)培養(yǎng)說明書

                             

                             

                            細胞特性

                            1) 來源:膽管癌

                            2) 形態(tài)上皮細胞貼壁生長

                            3) 含量:>1x106 /mL

                            4) 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

                            5) 規(guī)格:T25或者1mL凍存管包裝

                             

                            細胞接受后的處理:

                            1) 收到細胞后,請檢查是否漏液,如果漏液,請拍照片發(fā)給我們。

                            2) 請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài),去掉封口膜并將T25置于37培養(yǎng)約2-3h

                            3) 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,添加6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。

                            4) 如果細胞長滿(90%以上)請及時進行細胞傳代,傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。

                            5) 接到細胞次日,請檢查細胞是否污染,若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系。

                             

                            細胞用途:僅供科研使用。

                                                   

                            本公司細胞培養(yǎng)操作規(guī)程,供參考

                            一.培養(yǎng)基培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

                            1) 準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091)90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%

                            2) 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%

                            3) 凍存液90%血清10%DMSO現(xiàn)用現(xiàn)液氮儲存。

                            二. 細胞處理

                            1) 復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

                            2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%可進行傳代培養(yǎng)

                            對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

                            1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子PBS潤洗細胞1-2

                            2. 2ml消化液0.25%Trypsin-0.53mM EDTA培養(yǎng)瓶中,置于37培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加3ml此細胞的培養(yǎng)基終止消化

                            3. 輕輕打后吸出,移入15ml離心管中,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。

                            4. 移入到事先準(zhǔn)備好的含有5ml培養(yǎng)基T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)

                            3)細胞凍存:細胞生長狀態(tài)良好時,進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,先要消化處理并進行細胞計數(shù)消化方法按照細胞傳代方法的1-3驟進行,最后的重懸液使用血清。懸浮細胞直接計數(shù)后離心,用血清重懸浮DMSO最終濃度為10%加入DMSO迅速混勻,按每1ml數(shù)量分配到凍存管中。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106細胞凍存。

                             

                            注意事項:

                            1. 收到細胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系

                            2. 所有動物細胞均視為潛在的生物危害性必須在二級生物安全內(nèi)操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

                             

                            實驗代做服務(wù):

                            ELISA試劑盒免費代檢測

                            CCK8檢測

                            HE染色

                            蛋白相互作用分析

                            Western Blot

                            免疫組化IHC染色

                            熒光定量PCR

                            動物模型服務(wù)

                            流式細胞檢測

                            免疫熒光染色

                            激光共聚焦

                            DNA甲基化實驗

                            石蠟/冰凍切片

                            透射電鏡服務(wù)

                            掃描電鏡實驗

                            蛋白雙向(2-D)

                            動物實驗

                            免疫共沉淀

                            原位雜交(FIsh

                            蛋白質(zhì)純化

                            分子克隆和質(zhì)粒載體構(gòu)建服務(wù)

                            組蛋白甲基化磷酸化乙酰化

                             

                            蛋白雙向2D-WB

                             

                            藥理毒理動物實驗

                             

                            番紅O固綠染色

                            明膠酶譜MMP

                            酶活性檢測

                            動物造模/模型實驗服務(wù)

                            滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

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