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                            網(wǎng)站首頁技術(shù)中心 > 氟苯尼考快速檢測試劑盒操作說明書
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                            氟苯尼考快速檢測試劑盒操作說明書
                            更新時間:2021-05-24 點(diǎn)擊量:3160

                             

                             

                             

                            氟苯尼考快速檢測試劑盒說明書

                             

                            一、原理

                             

                            本試劑盒采用間接競爭 ELISA 方法,在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物氟苯尼考將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭抗氟苯尼考抗體,加入酶標(biāo)記物后,用 TMB 底物顯色,樣本吸光值與其所含殘留物氟苯尼考的含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物氟苯尼考的含量。

                             

                            二、試劑盒特性

                             

                            • 試劑盒靈敏度:  0.1ppb

                             

                            u 孵育溫度: 25

                             

                            u 孵育時間: 30min15min

                             

                            • 樣本檢測下限

                             

                            蜂蜜、組織·········································  0.1ppb

                             

                            牛奶················································  0.2ppb

                             

                            • 交叉反應(yīng)率

                             

                            氟苯尼考· ································· ··· 100%

                             

                            甲砜霉素 ········································ < 0.1%

                             

                            氟苯尼考胺 ······································  11%

                             

                            氯霉素 ············································ < 0.1%

                             

                            • 樣本回收率

                             

                            ······································

                            90%±30%

                            ······································

                            90%±30%

                            ······································

                            90%±30%

                            三、試劑盒組成

                             

                             

                             

                             

                             

                             

                             

                            1

                             

                            微量測試孔

                            每條 8 孔,一板 12 條

                             

                             

                             

                             

                             

                             

                             

                            標(biāo)準(zhǔn)液×6 瓶

                            0ppb

                            0.1ppb

                            2

                             

                            0.2ppb

                            0.4ppb

                             

                            1ml/瓶)

                             

                             

                            0.8ppb

                            1.6ppb

                             

                             

                             

                             

                             

                             

                             

                             

                            3

                             

                            酶標(biāo)記物

                            7ml

                            紅色帽

                             

                             

                             

                             

                             

                             

                            4

                            抗體工作液

                            7ml

                            藍(lán)色帽

                             

                             

                             

                             

                            5

                            底物 A 液

                            7ml

                            白色帽

                             

                             

                             

                             

                            6

                            底物 B 液

                            7ml

                            黑色帽

                             

                             

                             

                             

                            7

                            終止液

                            7ml

                            黃色帽

                             

                             

                             

                             

                            8

                            20X 濃縮洗滌液

                            40ml

                            白色帽

                             

                             

                             

                             

                            9

                            2X 濃縮復(fù)溶液

                            50ml

                            透明帽

                             

                             

                             

                             

                             

                            四、所用儀器、試劑

                             

                            具備的儀器:酶標(biāo)儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平(感量 0.01g)、氮吹儀、恒溫箱

                             

                            微量移液器:單道 20200µl、單道 1001000µl

                             

                            多道 30300 µl

                             

                            劑:乙酸乙酯、正己烷、乙腈

                             

                            五、樣本前處理步驟

                             

                            • 樣本處理前須知

                             

                            a)實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭,吸取不同試劑時要更換吸頭。

                             

                            b)實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈,必要時可對實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔,以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

                            u 樣本前處理需配制:

                             

                            配液 1  樣本復(fù)溶液:

                             

                            2X 濃縮復(fù)溶液用去離子水按 11 稀釋。 (1 份濃縮復(fù)溶掖+1 份去離子水)

                             

                            配液 2  樣本提取液:

                             

                            將乙腈與乙酸乙酯按 1:2 比例混合均勻(1 份乙腈+2 份乙酸乙酯)。

                            • 樣本處理:

                             

                            a)組織 (雞肉/肝、豬肉/肝、蝦、魚等)樣本處理方法

                             

                            1、稱取均質(zhì)后的樣本 3±0.05g  50ml 離心管中,先加入 3ml 去離子水混勻后再加入 6ml 乙酸乙酯,振蕩 2min,室溫 4000r/min 以上離心 10min

                             

                            2、取出 2ml 上層液體在 50-60℃氮?dú)饬髦写蹈桑?/span>

                             

                            3、加入 2 ml 正己烷溶解干燥的殘留物,再加 1ml樣本復(fù)溶液混合 30s,室溫 4000r/min 以上離心5min;去除上層有機(jī)相;

                             

                            4、取 50 µl 下層相用于分析

                             

                            樣本稀釋倍數(shù):  1 

                             

                            b)蜂蜜處理方法

                             

                            1、取 2±0.05 g 蜂蜜,放入離心管中,用 4ml 去離子水溶解;加入 4ml 乙酸乙酯振蕩 2min,室溫

                             

                            4000r/min 以上離心 10min2、移取 2ml 上層清澈液到另一離心管中,50-60

                             

                            氮?dú)饬飨赂稍铮挥?/font> 1ml 樣本復(fù)溶液溶解干燥的殘留物,混合 30s

                             

                            3、取 50 µl 用于分析。

                             

                            樣本稀釋倍數(shù): 1 

                             

                            c)牛奶樣本處理方法

                             

                            1 吸取均質(zhì)后的牛奶樣本 1ml  5ml 離心管中,加 2ml 樣本提取液(配液 2)振蕩 1min室溫 4000r/min 以上離心 10min2 取出 1ml 上層液體在 50-60℃氮?dú)饬髦写蹈桑?/span>

                             

                            3、加入 1 ml 正己烷溶解干燥的殘留物,再加 1ml樣本復(fù)溶液混合 30s,室溫 4000r/min 以上離心5min;去除上層有機(jī)相;

                             

                            4  50 µl 下層相用于分析。

                             

                            樣本稀釋倍數(shù):  2 

                             

                            六、酶標(biāo)免疫分析程序:

                             

                            • 測定前應(yīng)須知:

                             

                            1 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫2025℃)。

                             

                            2 使用之后立即將所有試劑放回 28℃。

                             

                            3  ELISA 分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性,正確的洗板操作是 ELISA 測定程序中的要點(diǎn)。

                             

                            4 所有恒溫孵育過程,避免光線照射,用蓋板膜蓋住微孔板。

                            • 操作步驟:

                             

                            1、從 28℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑,室溫(2025℃)平衡 30min 以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

                             

                            2、取出框架及需要數(shù)量的微孔,將不用的微孔放

                             

                            入自封袋,保存于 2-8℃。

                             

                            3、配液:將 40ml 濃縮洗滌液(20 倍濃縮)用去離子水按照 119 稀釋(1 份濃縮洗滌液+19 份去離子水),或按所需用量配制洗滌液。

                             

                            4、編號:將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號,每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做 2 孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。

                             

                            5、加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品 50µl/孔到各自的微孔中,加入酶標(biāo)記物 50µl/孔,然后再加入抗體工作液 50µl/ 孔,用蓋板膜封板,25℃環(huán)境中反應(yīng) 30min

                             

                            6、將孔內(nèi)液體甩干,用已稀釋的洗滌液 250µl/孔洗板 45 次,每次間隔 1530 秒,用吸水紙拍干(拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。

                             

                            7、顯色:加入底物 A  50µl/孔,再加入底物 B 50µl/孔,輕輕振蕩混勻,25℃環(huán)境中避光顯色 15min

                             

                            8、測定:加入終止液 50µl/孔,輕輕振蕩混勻,設(shè)定酶標(biāo)儀于 450nm 處(建議用雙波長 450/630n m 檢測,5min 內(nèi)讀數(shù)),測定每孔 OD 值。

                             

                            七、結(jié)果判定

                             

                            結(jié)果判定有兩種方法,粗略判定可用第 1 種方法,定量判定用第 2 種方法。注意樣本吸光度值與其所含氟苯尼考量成負(fù)相關(guān)。

                             

                            1、粗略判定:

                             

                            用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本 1 的吸光度值為 0.3,樣本 2 的吸光度值為 1.0,標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是:0ppb

                             

                            • 2.243 0.1ppb  1.8160.2ppb  1.4150.4ppb

                             

                            • 0.740.8ppb  0.3131.6ppb  0.155。則樣本

                             

                            1 的濃度范圍是 0.8ppb1.6ppb;樣本 2 的濃度范圍是 0.2ppb0.4ppb,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中氟苯尼考實(shí)際濃度。

                             

                            2、定量分析

                             

                            1)百分吸光率的計算,標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的吸光度值的平均值(雙孔)除以第一個標(biāo)準(zhǔn)(0 標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值,再乘以 100%,即

                             

                             

                            B

                            百分吸光率(%)= ×100%

                            B0

                             

                            B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值 B0—0ng/ml 標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

                             

                            2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計算以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),以氟苯尼考標(biāo)

                             

                            準(zhǔn)品濃度(ng/ml)的半對數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中氟苯尼考實(shí)際濃度。

                             

                            若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。(索取)

                             

                            八、 注意事項(xiàng)

                             

                            1、室溫低于 25℃或試劑及標(biāo)本未回到室溫(2025℃)會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的 OD 值偏低。

                             

                            2、在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會伴隨著標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。

                             

                            3、混合要均勻,否則會出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。

                             

                            4、反應(yīng)終止液為 2M 硫酸,避免接觸皮膚。

                             

                            5、不要使用過了有效日期的試劑盒;稀釋或攙雜使用會引起靈敏度、OD 值變化;不要交換使用不同批號的盒中試劑。

                             

                            6、不用的微孔板放進(jìn)自封袋重新密封;標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。

                             

                            7、顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。標(biāo)準(zhǔn)品 1 的吸光度值小于 0.5 時,表示試劑可能變質(zhì)。

                             

                            8、該試劑盒理想反應(yīng)溫度為 25℃,溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

                             

                            九、儲藏條件和保質(zhì)期

                             

                            1、儲藏條件:試劑盒于 2-8℃保存,不要冷凍。

                             

                            2、保 質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為 1 年,生產(chǎn)日期見包裝盒。

                             

                            提示:酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣,酶標(biāo)板仍然正常有效,不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,請放心使用。

                             

                             

                             

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