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                            網(wǎng)站首頁技術(shù)中心 > 嘔吐毒素(DON)ELISA檢測試劑盒使用說明書
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                            嘔吐毒素(DON)ELISA檢測試劑盒使用說明書
                            更新時間:2022-03-16 點擊量:1843

                            本試劑盒只能用于科學(xué)研究,不得用于醫(yī)學(xué)診斷

                            嘔吐毒素DONELISA檢測試劑盒

                            使用說明書

                            檢測原理

                            試劑盒采用競爭法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包嘔吐毒素的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的競爭抗原,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的嘔吐毒素(DON)相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

                            樣品收集、處理及保存方法

                            1.  血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

                            2.  血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

                            3.  細胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

                            4.  組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

                            5.  保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

                            自備物品

                            1.酶標儀(450nm)

                            2.高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

                            3.37℃恒溫箱

                            操作注意事項

                            1.   試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶,這屬于正常現(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。

                            2.   實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。

                            3.   按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5倍,最終結(jié)果乘以5才是樣本實際濃度。

                            4.   嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

                            5.   所有液體組分使用前充分搖勻。

                            試劑盒組成

                            名稱

                            96孔配置

                            48孔配置

                            備注

                            微孔酶標板

                            12孔×8條

                            12孔×4條

                            標準品

                            0.3mL*6管

                            0.3mL*6管

                            樣本稀釋液

                            6mL

                            3mL

                            競爭抗原-HRP

                            6mL

                            3mL

                            20×洗滌緩沖液

                            25mL

                            15mL

                            按說明書進行稀釋

                            底物A

                            6mL

                            3mL

                            底物B

                            6mL

                            3mL

                            終止液

                            6mL

                            3mL

                            封板膜

                            2張

                            2張

                            說明書

                            1份

                            1份

                            自封袋

                            1個

                            1個

                            注:標準品(S0-S5)濃度依次為:0、50100200400800 PPb

                            試劑的準備

                             20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

                            洗板方法

                            1.   手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。

                            2.   自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

                            操作步驟

                            1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

                            2.  設(shè)置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;

                            3.  樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加。

                            4.  除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的競爭抗原50μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

                            5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機洗板)。

                            6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

                            7.  每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。

                            結(jié)果判斷

                            1.  15分鐘內(nèi)在波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值;

                            2.  百分結(jié)合率計算:設(shè)S0管計數(shù)為B0,各標準管或樣品管計數(shù)為B,非特異管計數(shù)為NSB,則百分結(jié)合率計算公式如下:B/B0=(B-NSB)/(B0-NSB)×100%

                            3.  logit計算:各標準點或樣品管的logit值計算公式如下:logit=ln(B/B0)/(1-B/B0)

                            4.  將標準品的OD均值與標準品0點的OD均相除,為標準點的百分結(jié)合率,在log-logit坐標紙上繪圖。

                            5.  Log-logit雙對數(shù)標準曲線:坐標紙上橫軸從左至右第一個1-9表示為第一個10進位,第二個1-9表示為第二個10進位。第三個1-9表示為第三個10進位。坐標紙縱軸為百分比(1-99),即各標準吸光值的百分結(jié)合率。取一條通過各點的直線。要求盡可能多的點在線上,同時剩余的點均勻分布在直線的兩邊。樣品也同樣由吸光值計算百分結(jié)合率,再從縱軸上的相應(yīng)結(jié)合率找到直線上的點,此點對應(yīng)的橫坐標濃度即為樣品的濃度,無須換算。

                            6.  人工處理:以標準濃度取log值為橫坐標,對應(yīng)的logit值為縱坐標在普通坐標紙上或以標準濃度為橫坐標,對應(yīng)的B/B0為縱坐標在logit-log坐標紙上畫出標準曲線(理想化時是一條直線)。根據(jù)待測樣

                            品的B/B0可以從坐標紙上查出樣品的濃度值。如果使用普通坐標紙,查出的數(shù)值應(yīng)取反對數(shù)才是最后的濃度值。

                            7.  自動處理:使用logit-log或四參數(shù)數(shù)據(jù)處理模式,由電腦自動計算得出結(jié)果。

                            8.  敏感度:1.0 PPb

                            9.  圖例

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                            試劑盒性能

                            1.  準確性:標準品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,大于等于0.9900。

                            2.  靈敏度:最DI檢測濃度小于10 PPb

                            3.  特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

                            4.  重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

                            5.  貯藏:2-8℃,避光防潮保存。

                            6.  有效期:6個月

                            2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域生物醫(yī)學(xué)實驗外包及論文潤色服務(wù),協(xié)助客戶各類實驗服務(wù)及論文潤色,是客戶您值得信賴的科研合作伙伴!

                            如果您受時間、試驗條件等限制而無法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。

                            實驗代做服務(wù):

                             


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