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                            替米考星快速檢測試劑盒(檢組織0.5ppb)
                            更新時間:2022-08-04 點擊量:1587

                            EF54A\H1

                            替米考星

                            快速檢測試劑盒說明書

                            一、原理

                            本試劑盒采用間接競爭ELISA方法,在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物替米考星將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭替米考星抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光值與其所含殘留物替米考星的含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物替米考星的含量。

                            二、試劑盒特性

                            試劑盒靈敏度:   0.5ppb

                            孵育溫度:       25℃

                            孵育時間:       20min10min

                            樣本檢測下限

                            雞肉、豬肉 ·········································  2ppb

                            交叉反應(yīng)率

                            替米考星 ··········································  100%

                            樣本回收率

                            雞肉、豬肉 ······································· 90±30%

                            三、試劑盒組成

                            1

                            微量測試孔

                            每條8孔,一板12

                            2

                            標(biāo)準(zhǔn)×6

                            1ml/瓶)

                            0ppb

                            0.5ppb

                            1.5ppb

                            4.5ppb

                            13.5ppb

                            40.5ppb

                            3

                            酶標(biāo)記物

                            7ml

                            紅色帽

                            4

                            抗體工作液

                            7ml

                            藍(lán)色帽

                            5

                            底物A

                            7ml

                            白色帽

                            6

                            底物B

                            7ml

                            黑色帽

                            7

                            終止液

                            7ml

                            黃色帽

                            8

                            20X濃縮洗滌液

                            15ml

                            白色帽

                            9

                            5X樣本提取液

                            50ml×2

                            透明帽

                            四、所用儀器、試劑

                            具備的儀器:酶標(biāo)儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平(感量0.01g)、恒溫箱、打印機

                            微量移液器:單道 20200µl、單道1001000µl、多道 30300 µl

                            需要的試劑:濃鹽酸、氫氧化鈉

                            五、樣本前處理步驟

                            樣本處理前須知

                            a)實驗中必須使用一次性吸頭,吸取不同試劑時要更換吸頭。

                            b)實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈,必要時可對實驗器具進(jìn)行清潔,以避免污染干擾實驗結(jié)果。

                            樣本前處理需配制:

                            配液1  0.2M 鹽酸

                                   17.2ml濃鹽酸加去離子水定容至1L

                            配液2  1M 氫氧化鈉

                                   4g氫氧化鈉固體加去離子水定容至

                                   100ml

                            配液3  樣本提取

                                   去離子水5X樣本提取液41比例混

                                   合均勻

                            樣本處理:

                            a 雞肉、豬肉樣本處理方法: 

                            1、取2.0±0.05g粉碎后的樣本于50ml離心管中;

                               加入3ml 0.2M鹽酸(見配液1),充分振蕩3min

                            2、加入600ul 1M 氫氧化鈉 (見配液2)溶液和

                               2.4ml 樣本提取液(見配液3,充分振蕩3min

                               20℃ 4000r/min以上離心10min

                            3、50µl上層液進(jìn)行分析(注:離心后若有脂肪

                               層,先去除脂肪層或撥開脂肪層取清澈液體進(jìn)行

                               分析)。

                               樣本稀釋倍數(shù):4     

                            六、 酶標(biāo)免疫分析程序:

                            測定前應(yīng)須知:

                            1、 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫(2025℃)。

                            2、 使用之后立即將所有試劑放回28℃

                            3、 ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性,正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。

                            4所有恒溫孵育過程,避免光線照射,用蓋板膜

                                蓋住微孔板。

                            操作步驟:

                            1、 28℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑,室溫(2025)平衡30min以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

                            2、 取出框架及需要數(shù)量的微孔,將不用的微孔放入自封袋,保存于28℃

                            3、 配液:將15ml濃縮洗滌液(20倍濃縮)用去離子水按照119稀釋(1份濃縮洗滌液+19份去離子水),或按所需用量配制洗滌液。

                            4、 編號:將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號,每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。

                            5、 加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50µl/孔到各自的微孔中,然后加酶標(biāo)記物50µl/孔,再加入50µl/孔的抗體工作液,用蓋板膜蓋板,輕輕振蕩混勻,25℃環(huán)境反應(yīng)20min

                            6、 將孔內(nèi)液體甩干,用稀釋后的洗滌液250µl/孔洗板45次,每次間隔1530秒,用吸水紙拍干(拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。

                            7、 顯色:加入底物A50µl/孔,再加入底物B50µl/孔,輕輕振蕩混勻,25℃環(huán)境中避光顯色10min

                            8、 測定:加入終止液50µl/孔,輕輕振蕩混勻,設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處(建議用雙波長450/630nm檢測,5min內(nèi)讀數(shù)),測定每孔OD值。

                            七、結(jié)果判定

                            結(jié)果判定有兩種方法,粗略判定可用第1種方法,定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含替米考星量成負(fù)相關(guān)。

                            1、粗略判定:

                            用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.2,樣本2的吸光度值為1.0,標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是:0ppb2.0050.5ppb1.6431.5ppb1.194.5ppb0.6713.5ppb0.2640.5ppb0.13。則樣本1的濃度范圍是13.5ppb40.5ppb;樣本2的濃度范圍是1.5ppb4.5ppb,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中替米考星實際濃度。

                            2、定量分析

                            1)百分吸光率的計算,標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的吸光度值的平均值(雙孔)除以第一個標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值,再乘以100%,即

                            百分吸光率(%)=

                            B

                            ×100%

                            B0

                            B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值

                            B0—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

                            2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計算

                            以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),以替米考星標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ng/ml)的半對數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中替米考星實際濃度。

                            若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。(歡迎來電索取)

                            八、 注意事項

                            1、 室溫低于25℃或試劑及標(biāo)本未回到室溫(2025℃)會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。

                            2、 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會伴隨著標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。

                            3、 混合要均勻,否則會出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。

                            4、 反應(yīng)終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。

                            5、 不要使用過了有效日期的試劑盒;稀釋或攙雜使用會引起靈敏度、OD值變化;不要交換使用不同批號的盒中試劑。

                            6、 不用的微孔板放進(jìn)自封袋重新密封;標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。

                            7、 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。標(biāo)準(zhǔn)品1的吸光度值小于0.5時,表示試劑可能變質(zhì)。

                            8、 該試劑盒最佳反應(yīng)溫度為25℃,溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

                            九、儲藏條件和保質(zhì)期

                            1、 儲藏條件:試劑盒于28℃保存,不要冷凍。

                            2、  質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見包裝盒。

                            提示:酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣,酶標(biāo)板仍然正常有效,不影響實驗結(jié)果,請放心使用。

                             

                             

                            2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域生物醫(yī)學(xué)實驗外包及論文潤色服務(wù),協(xié)助客戶各類實驗服務(wù)及論文潤色,是客戶您值得信賴的科研合作伙伴!

                            如果您受時間、試驗條件等限制而無法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。

                            實驗代做服務(wù):


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