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                            網(wǎng)站首頁技術(shù)中心 > XWLC-05 云南宣威肺腺癌細胞系(轉(zhuǎn)染TEM8帶GFP)
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                            XWLC-05 云南宣威肺腺癌細胞系(轉(zhuǎn)染TEM8帶GFP)
                            更新時間:2023-02-14 點擊量:702

                            XWLC-05 云南宣威肺腺癌細胞系

                            Yunnan Xuanwei Lung Adenocarcinoma Cell Line ,XWLC05

                            貨號:YJ-h228(轉(zhuǎn)染TEM8帶GFP)

                            價格: 3000.0

                            規(guī)格: 1*10 6

                            細胞特性

                            1) 來源:肺癌

                            2) 形態(tài):貼壁生長

                            3) 含量:>1x10^6 個/mL

                            4) 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

                            5) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

                            運輸和保存

                            可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式

                            1)干冰運輸,收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇;

                            2)存活細胞,收到后應(yīng)繼續(xù)生長,傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

                            3)收到細胞后請拍照,3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染,請及時拍照與我們聯(lián)系。

                            QQ圖片20230214175352.png


                            細胞用途:僅供科研使用。

                            細胞接收后的處理:

                            1) 收到細胞后,請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們。

                            2) 在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)時,最好在低倍鏡(4或5X物鏡)下進行,能準確判斷細胞的傳代密度。看細胞的形態(tài)請在10X和20×物鏡下,同時給剛收到的細胞拍照,(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

                            3) 觀察好細胞狀態(tài)后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h。

                            4) 貼壁細胞:在運輸過程中貼壁細胞會有脫落的現(xiàn)象,如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長,可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中(或新的培養(yǎng)瓶中)。

                            5) 懸浮細胞:T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中(加入按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基)。

                            6)備注:運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞,請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后第一次傳代建議1:2傳代 。

                            細胞培養(yǎng)步驟

                            一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:

                            1) 準備RPMI-1640(推薦YJ-0002)培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%。

                            2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

                            3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

                            二. 細胞處理:

                            1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?50px皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

                            2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

                            對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

                            1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

                            2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

                            3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

                            4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

                            注:第一次傳代推薦傳代比例為1:2,以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定。

                            3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。

                            下面T25瓶為例;

                            1.細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,細胞變圓脫落后,加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

                            2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X10^6個細胞凍存。

                            3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

                            2011年開始我們致力于在生命科學領(lǐng)域生物醫(yī)學實驗外包及論文潤色服務(wù),協(xié)助客戶各類實驗服務(wù)及論文潤色,是客戶您值得信賴的科研合作伙伴!

                            如果您受時間、試驗條件等限制而無法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。

                            實驗代做服務(wù):



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