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                            網站首頁技術中心 > 小鼠環(huán)氧化酶-1(COX-1)ELISA試劑盒說明書
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                            小鼠環(huán)氧化酶-1(COX-1)ELISA試劑盒說明書
                            更新時間:2011-09-16 點擊量:1138

                            小鼠環(huán)氧化酶-1(COX-1)ELISA試劑盒說明書

                            本試劑僅供研究使用       目的:本試劑盒用于測定小鼠血清,細胞上清及相關液體樣本中環(huán)氧化酶-1(COX-1)的含量。上海研謹生物高品質ELISA試劑盒供應商,品質,售后完善。歡迎垂詢: 提供免費代檢測服務。

                            實驗原理

                               本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本小鼠環(huán)氧化酶-1COX-1)水平。用純化的小鼠COX-1抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入環(huán)氧化酶-1COX-1),再與HRP標記的COX-1抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的環(huán)氧化酶-1COX-1)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品小鼠環(huán)氧化酶-1COX-1)濃度。

                            試劑盒組成

                            試劑盒組成

                            48孔配置

                            96孔配置

                            保存

                            說明書

                            1

                            1

                            封板膜

                            2片(48

                            2片(96

                            密封袋

                            1

                            1

                            酶標包被板

                            1×48

                            1×96

                            2-8℃保存

                            標準品:180U/L

                            0.5ml×1

                            0.5ml×1

                            2-8℃保存

                            標準品稀釋液

                            1.5ml×1

                            1.5ml×1

                            2-8℃保存

                            酶標試劑

                            3 ml×1

                            6 ml×1

                            2-8℃保存

                            樣品稀釋液

                            3 ml×1

                            6 ml×1

                            2-8℃保存

                            顯色劑A

                            3 ml×1

                            6 ml×1

                            2-8℃保存

                            顯色劑B

                            3 ml×1

                            6 ml×1

                            2-8℃保存

                            終止液

                            3ml×1

                            6ml×1

                            2-8℃保存

                            濃縮洗滌液

                            20ml×20倍)×1

                            20ml×30倍)×1

                            2-8℃保存

                            樣本處理及要求

                            1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應再次離心。

                            2. 血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。

                            3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

                            4. 細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBSPH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

                            5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBSPH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐3?/font>2-8℃的溫度。加入一定量的PBSPH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

                            6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但避免反復凍融.

                            7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

                            操作步驟:

                            1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在*、第二孔中分別加標準品100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為120 U/80 U/L40 U/L20 U/L10 U/L)。

                            2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻

                            3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘

                            4. 配液:將3048T20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水3048T20倍)倍稀釋后備用。

                            5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

                            6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外

                            7. 溫育:操作同3

                            8. 洗滌:操作同5

                            9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘. 

                            10. 終止:每孔加終止50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)

                            11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值) 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

                            注意事項:

                            1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

                            2. 濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

                            3. 各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

                            4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

                            5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

                            6. 底物請避光保存。

                            7. 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

                            8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

                            9. 本試劑不同批號組分不得混用。

                            10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

                            計算

                            以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,    

                            在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD      

                            值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋      

                            倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標      

                            準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD      

                            代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋      

                            倍數(shù),即為樣品的實際濃度。                  

                              

                                                                          

                            試劑盒性能:

                            1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.95以上。

                            2.批內與批見應分別小于9%11%

                                        

                            保存條件及有效期:

                            1.試劑盒保存:2-8

                            2.有效期:6個月

                            海研謹生物科技有限公司專業(yè)銷售各種品牌價格檔次的ELISA試劑盒。服務于高校及免疫學科研單位。*,售后服務完善。并可以免費代檢測,更好的為您服務。

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