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                            網(wǎng)站首頁技術(shù)中心 > LOVO/5FU 人結(jié)直腸癌細(xì)胞氟尿嘧啶耐藥株
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                            LOVO/5FU 人結(jié)直腸癌細(xì)胞氟尿嘧啶耐藥株
                            更新時間:2023-09-12 點擊量:650

                            LOVO/5FU 人結(jié)直腸癌細(xì)胞氟尿嘧啶耐藥株

                            Fluorouracil resistant human colorectal cancer cell line ,LOVO 5FU

                            貨號:YJ-0057a(STR(lovo)鑒定)

                            價格: 2500.0

                             規(guī)格: 1*10 6

                            細(xì)胞介紹

                            注:本培養(yǎng)基是不直接添加氟尿嘧啶藥物的。

                             

                            細(xì)胞特性

                            1 來源:結(jié)直腸腺癌

                            2 形態(tài):上皮樣   貼壁生長

                            3 含量:>1x10^6  細(xì)胞數(shù)

                            4 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

                            5 用途:僅供科研使用。

                            運輸和保存

                            干冰運輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

                            11mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。

                            2T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

                            細(xì)胞接收后的處理

                            1)收到細(xì)胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們。

                            2)請在45X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時給剛收到的細(xì)胞拍照(10×20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

                            3)貼壁細(xì)胞:細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細(xì)胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL,放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上,可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中,若因運輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收。

                            4備注:運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶12傳代 。                      

                            一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

                            1)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%

                            2)完全培養(yǎng)基的配制:

                            準(zhǔn)備F12K(推薦YJ-0007) 培養(yǎng)基:優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%;補充F12K基礎(chǔ)培養(yǎng)基至所需體積。

                            準(zhǔn)備F12K5-Fu完全培養(yǎng)基:優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%5-Fu400~10^65uM;補充F12K基礎(chǔ)培養(yǎng)基至所需體積。

                            3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

                            LOVO 5FU 人結(jié)直腸癌細(xì)胞氟尿嘧啶耐藥株.png


                            注意:

                            ① 細(xì)胞在傳代和剛復(fù)蘇時較為脆弱,中止液須為不含5-Fu的完全培養(yǎng)基,且在細(xì)胞未貼壁期間和貼壁前期需用不含5-Fu的完全培養(yǎng)基,待細(xì)胞生長狀態(tài)穩(wěn)定時再根據(jù)需要濃度添加5-Fu

                            若細(xì)胞生長狀態(tài)較為緩慢時,可適當(dāng)降低5-Fu的濃度,或使用不含5-Fu的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)至細(xì)胞生長狀態(tài)較好時,再更換為所需的5-Fu濃度。

                            二、細(xì)胞培養(yǎng)

                            1)細(xì)胞復(fù)蘇

                            將恒溫水浴鍋中的水預(yù)熱到37℃

                            準(zhǔn)備一支15ml離心管,加入5mL10%FBS的完全培養(yǎng)基,放入37℃水浴鍋中預(yù)熱;

                            戴上護目鏡,厚毛線手套后,從液氮罐中取出要復(fù)蘇的細(xì)胞,盡快轉(zhuǎn)入37℃恒溫水浴鍋中復(fù)溫晃動凍存管以提高復(fù)溫速率;

                            將融化了的凍存管中的細(xì)胞吸入事先準(zhǔn)備的離心管中,混勻后,1000rpm離心5min

                            準(zhǔn)備一個T25培養(yǎng)瓶,寫上細(xì)胞名稱、日期,再加入4mL完全培養(yǎng)基;

                            離心完成后棄去上清,用1mL完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后,轉(zhuǎn)入T25細(xì)胞培養(yǎng)中,混勻后轉(zhuǎn)入CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)靜置。

                            注意:從液氮中取出細(xì)胞凍存管時,若凍存管內(nèi)有液氮進(jìn)入,需擰松凍存管,排出內(nèi)部殘留的液氮,之后擰緊凍存管,置于干冰上,然后放入37℃水浴中,避免溫差太大造成液氮快速氣化而爆炸。

                            2)細(xì)胞傳代

                            當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到85%以上時,可進(jìn)行傳代;

                            在生物安全柜內(nèi),打開培養(yǎng)瓶瓶口,收集瓶內(nèi)的培養(yǎng)基;

                            向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入3mL無菌的1×PBS 后,水平放置培養(yǎng)瓶,使PBS能夠浸潤到培養(yǎng)瓶底面上所有的面積,吸棄PBS

                            向瓶內(nèi)加入消化液1mL0.25%胰蛋白酶),浸潤底面后放入37℃ CO2培養(yǎng)箱中孵育3~5min

                            孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞是否變圓飄起,若全部消化下來則直接向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入2mL10%FBS的完全培養(yǎng)基中,將懸液吸入15mL離心管;

                            注意:如還有部分細(xì)胞未消化下來,可采用分步消化:

                            a. 準(zhǔn)備一個無菌的15mL離心管,加入2mL10%FBS的完全培養(yǎng)基;

                            b.將消化下來的細(xì)胞吸入中的離心管內(nèi)中和(避免吹打);

                            c.向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入1mL 0.25%胰蛋白酶繼續(xù)消化2min左右,輕拍培養(yǎng)瓶,95%左右細(xì)胞脫落后加入2mL10%FBS的完全培養(yǎng)基中和,中和后的細(xì)胞懸液移入中的離心管內(nèi)。

                            ⑥1000rpm離心5min

                            準(zhǔn)備兩個新的T25培養(yǎng)瓶,各加入4mL完全培養(yǎng)基;

                            離心完成后,棄上清,用2mL完全培養(yǎng)基重懸離心細(xì)胞,將重懸后的細(xì)胞轉(zhuǎn)入2T25培養(yǎng)瓶,每個培養(yǎng)瓶各1mL

                            水平放置培養(yǎng)瓶,震蕩混勻后將培養(yǎng)瓶置于37℃5%CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。

                            3)細(xì)胞凍存  (注意:細(xì)胞凍存建議每瓶T25凍一支)

                            ①~⑥請參照傳代步驟;

                            離完成后,棄上清,用1mL凍存液重懸細(xì)胞沉淀,然后轉(zhuǎn)入1.8mL凍存管中;

                            將凍存管轉(zhuǎn)入填充滿異丙醇的程序降溫盒中,之后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中過夜降溫;

                            第二天,取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管,盡快轉(zhuǎn)入液氮罐中保存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

                            注意事項

                            1.收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。

                            2.收到細(xì)胞先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(視細(xì)胞密度而定)穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收細(xì)胞時就整體外觀拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài),100*,200*各一張),觀察記錄細(xì)胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù)。

                            3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊懀时竟局槐WC客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài),故客戶需要售后時需出示收到細(xì)胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時間證明,期間間隔時間不能大于7天。

                            4.所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

                            5.客戶在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,有技術(shù)問題可以聯(lián)系咨詢技術(shù)售后,我們隨時給予解答。

                             

                            2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域生物醫(yī)學(xué)實驗外包及論文潤色服務(wù),協(xié)助客戶各類實驗服務(wù)及論文潤色十余年,是客戶您值得信賴的科研合作伙伴!

                            如果您受時間、試驗條件等限制而無法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。

                            實驗代做服務(wù):


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