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                            網(wǎng)站首頁(yè)技術(shù)中心 > Kasumi-6 人急性髓細(xì)胞白血病細(xì)胞傳代/復(fù)蘇操作
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                            Kasumi-6 人急性髓細(xì)胞白血病細(xì)胞傳代/復(fù)蘇操作
                            更新時(shí)間:2024-05-11 點(diǎn)擊量:299

                            Kasumi-6 人急性髓細(xì)胞白血病細(xì)胞

                            ,Kasumi6

                            貨號(hào):YJ-h491

                            價(jià)格: 5000.0

                            規(guī)格: 1*106 

                            細(xì)胞介紹

                            Kasumi-6 是一種成粒細(xì)胞細(xì)胞系,于 1999 年從一名患有復(fù)發(fā)性急性髓系白血病(M2 亞型)的亞洲 64 歲男性患者的外周血中分離出來。Kasumi-6細(xì)胞系可以作為研究非t(8;21) M2型髓系白血病的細(xì)胞和分子生物學(xué)的模型,并可以闡明突變的C/EBPα在白血病發(fā)生中的作用。原始白血病細(xì)胞和 Kasumi-6 細(xì)胞系的編碼 CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白 α (C/EBPα)(一種關(guān)鍵的骨髓轉(zhuǎn)錄因子)的基因均存在半合子點(diǎn)突變。 這些細(xì)胞表達(dá) C/EBPα 蛋白,但缺乏 C/EBPα 結(jié)合活性。12-O-十四烷酰佛波醇-13-乙酸酯 (TPA) 誘導(dǎo) Kasumi-6 細(xì)胞分化為貼壁的單核細(xì)胞樣細(xì)胞。

                            細(xì)胞特性

                            1 來源:64歲 男性 外周血

                            2 形態(tài):粒細(xì)胞白血病,懸浮生長(zhǎng)

                            3 含量:>1x106 細(xì)胞數(shù)

                            4 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

                            5)用途:僅供科研使用。

                            運(yùn)輸和保存

                            干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

                            11mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

                            2T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

                            細(xì)胞接收后的處理

                            1) 收到細(xì)胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

                            2)請(qǐng)?jiān)?/span>45X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照(10×20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

                            3) 懸浮細(xì)胞:T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細(xì)胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中(加入按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基)。

                            4)備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶12傳代 。                      

                            一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備

                            1 準(zhǔn)備RPMI-1640NaHCO3 1.5g / L)(推薦YJ-128-0002)培養(yǎng)基; 20% FBS2 ng/ml重組人粒巨噬細(xì)胞集落刺激因子RH GM - CSFYJ-C0038), 雙抗,1%

                            2 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%

                            3 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

                            二. 細(xì)胞處理

                            1 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇

                            將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。

                            2 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

                            對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法

                            懸浮狀態(tài)下生長(zhǎng)的細(xì)胞,可以通過向培養(yǎng)瓶中添加完全培養(yǎng)基來維持細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài),一般情況下細(xì)胞密度維持在1×105~1×106個(gè)/mL(不同細(xì)胞對(duì)密度要求不同,)可以維持細(xì)胞的正常生長(zhǎng)。如需分瓶可以將細(xì)胞懸液收集到離心管中1000rpm,離心5min,棄去上清,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按12的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

                            3 細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

                            下面T25瓶為例;

                            1. 細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml.

                            2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,按每1ml凍存液含1×106~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

                            3. 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

                            注意事項(xiàng)

                            1.收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

                            2.收到細(xì)胞先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)(視細(xì)胞密度而定)穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài),100*200*各一張),觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù)。

                            3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊懀时竟局槐WC客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài),故客戶需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時(shí)間證明,期間間隔時(shí)間不能大于7天。

                            4.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

                             

                            2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)及論文潤(rùn)色服務(wù),協(xié)助客戶各類實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤(rùn)色十余年,是您值得信賴的科研合作伙伴!

                            如果您受時(shí)間、試驗(yàn)條件等限制而無法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。

                            實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù):


                            滬公網(wǎng)安備 31011802001677號(hào)

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                                                      绥江县| 当雄县| 邹城市| 四子王旗| 铜山县| 西贡区| 兰州市| 吴堡县| 横峰县| 富源县| 顺昌县| 年辖:市辖区| 綦江县| 呼图壁县| 鹤峰县| 桐柏县| 星子县| 西峡县| 资兴市| 勃利县| 靖州| 丹阳市| 色达县| 资溪县| 师宗县| 波密县| 集安市| 平安县| 彰武县| 安丘市| 昭平县| 亚东县| 贡嘎县| 滦南县| 牙克石市| 中西区| 中西区| 三台县| 林口县| 绥江县| 鄂尔多斯市|