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                            LLC+luc小鼠肺癌細胞熒光素酶標(biāo)記傳代/復(fù)蘇技巧
                            更新時間:2024-07-12 點擊量:343

                            LLC+luc小鼠肺癌細胞熒光素酶標(biāo)記

                            ,LLC/luc

                            貨號:YJ-0078a(LLC種屬鑒定)

                            價格: 3200.0

                            規(guī)格: 1x106

                            細胞描述

                            Lewis肺癌是一種從C57BL小鼠的肺中建立的細胞系,該細胞帶有原發(fā)性Lewis肺癌的植入所致的腫瘤,被廣泛用作轉(zhuǎn)移的模型,可用于研究癌癥化學(xué)治療劑的機制。

                            該細胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶Luc基因。

                            細胞特性

                            來源:小鼠肺癌組織

                            形態(tài):半貼壁生長,混合形態(tài),有上皮細胞樣,松散貼壁或懸浮有梭形、圓形等細胞形態(tài)

                            含量:含量:>1x106  細胞數(shù)

                            規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

                            用途:僅供科研使用。

                            細胞篩選

                            該細胞為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Luc的細胞,隨細胞傳代次數(shù)的增加,其Luc熒光強度會逐漸減弱。若實驗要求需要維持熒光強度,可以加入嘌呤霉素進行再次篩選。        

                            建議收到細胞后至少傳3代,凍存留種后再進行篩選。

                            初次進行細胞篩選時,建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基維持培養(yǎng),若無細胞漂浮或者漂浮較少,即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基繼續(xù)篩選,以此類推,至最高藥物濃度為5ug/ml。若篩選過程中,漂浮細胞大于60%,則停止篩選,換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng),至細胞密度約80%,可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進行篩選。當(dāng)加入5ug/ml嘌呤霉素時細胞正常增殖,可停止篩選,用不含藥完全培養(yǎng)基正常培養(yǎng)。

                            一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:

                            1) 準備:1640 基礎(chǔ)培養(yǎng)基(推薦:YJ-0002),優(yōu)質(zhì)胎牛血清10 %P/S 1 %

                            2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%

                            3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

                            二.細胞處理:

                            1 凍存細胞的復(fù)蘇:

                            將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

                            2 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

                            LLC+luc小鼠肺癌細胞熒光素酶標(biāo)記傳代/復(fù)蘇技巧


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