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                            網(wǎng)站首頁(yè)技術(shù)中心 > HELA+luc人宮頸癌細(xì)胞 熒光素酶標(biāo)記
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                            HELA+luc人宮頸癌細(xì)胞 熒光素酶標(biāo)記
                            更新時(shí)間:2024-07-31 點(diǎn)擊量:267

                            HELA+luc人宮頸癌細(xì)胞 熒光素酶標(biāo)記

                            HELA+luc HELA luciferase labeling of human cervical cancer cells ,HELA luc

                            貨號(hào):YJ-0056a(STR(hela鑒定))

                            價(jià)格: 3200.0

                            規(guī)格: 1*10 6

                            細(xì)胞介紹

                            角蛋白免疫過(guò)氧化物酶染色陽(yáng)性。 有報(bào)告稱MS751細(xì)胞含有人乳頭狀瘤病毒18 (HPV-18)序列。據(jù)報(bào)道,p53表達(dá)水平低,pRB(成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤抑制因子)表達(dá)水平正常。

                            該細(xì)胞通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶Luc基因。

                            細(xì)胞特性

                            1) 來(lái)源:宮頸腺癌

                            2) 形態(tài):上皮細(xì)胞樣,貼壁生長(zhǎng)

                            3) 含量:>1x106 個(gè)/mL

                            4) 污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

                            5) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

                            細(xì)胞篩選

                            該細(xì)胞為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Luc的細(xì)胞,隨細(xì)胞傳代次數(shù)的增加,其Luc熒光強(qiáng)度會(huì)逐漸減弱。若實(shí)驗(yàn)要求需要維持熒光強(qiáng)度,可以加入嘌呤霉素進(jìn)行再次篩選。        

                            建議收到細(xì)胞后至少傳3代,凍存留種后再進(jìn)行篩選。

                            初次進(jìn)行細(xì)胞篩選時(shí),建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基維持培養(yǎng),若無(wú)細(xì)胞漂浮或者漂浮較少,即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基繼續(xù)篩選,以此類推,至最高藥物濃度為5ug/ml。若篩選過(guò)程中,漂浮細(xì)胞大于60%,則停止篩選,換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng),至細(xì)胞密度約80%,可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進(jìn)行篩選。當(dāng)加入5ug/ml嘌呤霉素時(shí)細(xì)胞正常增殖,可停止篩選,用不含藥完全培養(yǎng)基正常培養(yǎng)。

                            運(yùn)輸和保存

                            可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式

                            1)干冰運(yùn)輸,收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇;

                            2)存活細(xì)胞,收到后應(yīng)繼續(xù)生長(zhǎng),傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

                            3)收到細(xì)胞后請(qǐng)拍照,3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染,請(qǐng)及時(shí)拍照與我們聯(lián)系。

                            細(xì)胞用途:僅供科研使用。

                            細(xì)胞接收后的處理

                            1) 收到細(xì)胞后,請(qǐng)檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

                            2) 在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)時(shí),最好在低倍鏡(4或5X物鏡)下進(jìn)行,能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度。看細(xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?0X和20×物鏡下,同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照,(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為細(xì)胞需要售后時(shí)提供收到細(xì)胞時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

                            3) 觀察好細(xì)胞狀態(tài)后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h。

                            4) 貼壁細(xì)胞:在運(yùn)輸過(guò)程中貼壁細(xì)胞會(huì)有脫落的現(xiàn)象,如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落或者脫落后抱團(tuán)生長(zhǎng),可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細(xì)胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到加有按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中(或新的培養(yǎng)瓶中)。

                            5) 懸浮細(xì)胞:T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細(xì)胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中(加入按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基)。

                            6)備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議1:2傳代 。

                            細(xì)胞培養(yǎng)步驟

                            一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

                            1) 準(zhǔn)備MEM(推薦YJ-0012)培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗1%。

                            2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

                            3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

                            二. 細(xì)胞處理:

                            1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

                            2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

                            HELA+luc人宮頸癌細(xì)胞 熒光素酶標(biāo)記.png


                            對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

                            1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

                            2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

                            3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

                            4 . 收到細(xì)胞后首次傳代推薦將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,建議客戶凍存一支備用,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2到1:5的比例進(jìn)行。

                            細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。

                             

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                            實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù):


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