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                            網(wǎng)站首頁(yè)技術(shù)中心 > SuperRT逆轉(zhuǎn)錄酶(RNase H-)說(shuō)明書
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                            SuperRT逆轉(zhuǎn)錄酶(RNase H-)說(shuō)明書
                            更新時(shí)間:2015-05-14 點(diǎn)擊量:1800

                            SuperRT逆轉(zhuǎn)錄酶(RNase H-)說(shuō)明書

                             

                             

                            SuperRT Reverse Transcriptase

                            目錄號(hào):YJ0740

                            保存條件:-20℃保存。

                            組分說(shuō)明

                             

                                          Cat. No.                YJ0740       YJ0740A

                                          Kit Size                   25           100

                                          SuperRT,200 U/μl          25 μl       100 μl

                                          5×RT Buffer              120 μl       500 μl

                             

                            本產(chǎn)品僅供科研使用,請(qǐng)勿用于臨床診斷及其他用途  

                             

                             

                            產(chǎn)品簡(jiǎn)介

                             

                              SuperRT逆轉(zhuǎn)錄酶是一種利用大腸桿菌工程菌進(jìn)行重組與表達(dá)的全新逆轉(zhuǎn)錄

                            酶。與Moloney鼠白血病病毒來(lái)源的M-MLV和鳥成髓細(xì)胞病毒來(lái)源的  AMV不同,該酶

                            不具有RNase H活性,能夠轉(zhuǎn)錄多種 RNA模板,可利用極低量的總RNA或mRNA

                            合成cDNA*鏈,起始樣本量可低至pg級(jí),zui大限度將RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA*鏈。

                            SuperRT逆轉(zhuǎn)錄酶與RNA親合能力強(qiáng),能通讀GC含量高,二級(jí)結(jié)構(gòu)復(fù)雜的RNA模板,獲

                            得高產(chǎn)量的cDNA。該酶耐熱性及穩(wěn)定性強(qiáng),操作簡(jiǎn)單快速,可以合成   100bp-12kb的

                            cDNA。適用于*鏈cDNA的合成、RT-PCR、RT-qPCR以及全長(zhǎng)cDNA文庫(kù)的構(gòu)建等。

                             

                            活性定義

                             

                              以Poly(A)為模板,oligo(dT)為引物,在  37℃條件下,10分鐘內(nèi)催化摻入  1

                            nmol的dTTP所需酶量定義為一個(gè)活性單位(U)。

                             

                            質(zhì)量控制

                             

                              200 U的本酶和1  μg的16 S,23 S  rRNA在37℃下反應(yīng)1小時(shí),RNA的電泳譜帶不

                            發(fā)生變化。

                             

                            注意事項(xiàng)

                             

                            1.在操作過(guò)程中應(yīng)避免RNase污染,防止RNA降解或?qū)嶒?yàn)中的交叉污染,建議在專門

                               的區(qū)域進(jìn)行RNA操作,使用專門的儀器和耗材,操作人員帶口罩和一次性手套并經(jīng)

                               常更換手套。

                            2.實(shí)驗(yàn)盡量使用一次性塑料器皿,若使用玻璃器皿,應(yīng)使用0.1%DEPC(焦碳酸二乙

                               酯)水溶液在37℃處理12小時(shí),并在120℃下高壓滅菌30分鐘后使用,或者將玻璃

                               器皿在180℃下干熱滅菌60分鐘后使用。實(shí)驗(yàn)中用到的無(wú)菌水應(yīng)使用 0.1%的DEPC

                               處理后進(jìn)行高壓滅菌。

                            3.本試劑盒中的所有試劑使用前請(qǐng)上下顛倒輕輕混勻,盡量避免起泡,并經(jīng)短暫離心

                               后使用。所涉及的酶類使用后應(yīng)盡快放回-20℃,避免反復(fù)凍融。

                            4.若起始RNA的量小于50  ng,建議加入RNA酶抑制劑(RNasin)。本試劑盒并未提

                               供,如需要可單獨(dú)向本公司訂購(gòu),貨號(hào):YJ0596。

                             

                            使用方法

                             

                            注意:1 ng-5 μg總RNA可建立20 μl反應(yīng)體系,如果總RNA量大于5 μg,請(qǐng)按比例擴(kuò)大反應(yīng)體系。i逆轉(zhuǎn)錄操作步驟:

                            1.將RNA模板、引物、dNTP Mix、RT Buffer、SuperRT和RNase-Free Water溶解并

                               置于冰上備用。

                            2.根據(jù)以下表格配制反應(yīng)體系,總體積為20 μl。

                             

                            試劑             20 μl反應(yīng)體系             終濃度

                            dNTP Mix,2.5 mM Each                  4  μl         500 μM Each

                            Oligo-dT Primer,100 μM

                            或  Random Primers,50 μM               1  μl

                            或  Specific Primer ,10 μM

                            RNA Template                          X  μl          50 pg-5 μg

                            5×RT Buffer                           4  μl              1×

                            SuperRT,200 U/μl                      1  μl

                             RNase-Free Water                  up to 20  μl

                             

                                注意:若起始RNA的量小于50 ng,則建議加入RNA酶抑制劑(RNasin)。本試劑盒并未提供,如需要可單獨(dú)向本公司訂購(gòu),貨號(hào):YJ0596。

                             

                            3.渦旋震蕩混勻,短暫離心,使管壁上的溶液收集到管底。

                            4.42℃孵育30-50分鐘,85℃孵育5分鐘。反應(yīng)結(jié)束后,短暫離心,置于冰上冷卻。

                            5.逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可直接用于PCR反應(yīng)和熒光定量PCR反應(yīng),或置于-20℃長(zhǎng)期保存。

                             

                              ii  若逆轉(zhuǎn)錄效率低,或RNA模板二級(jí)結(jié)構(gòu)復(fù)雜、GC含量高時(shí),建議采用以下步驟:

                            1.將RNA模板、引物、dNTP Mix、RT Buffer、SuperRT和RNase-Free Water溶解并

                               置于冰上備用。

                            2.根據(jù)以下表格配制反應(yīng)體系,總體積為15 μl。

                             

                             試劑                 20 μl反應(yīng)體系             終濃度

                             dNTP Mix,2.5 mM Each                   4  μl         500 μM Each

                             Oligo-dT Primer,100 μM

                             或  Random Primers,50 μM                1  μl

                             或  Specific Primer ,10 μM

                             RNA Template                           X  μl          50 pg-5 μg

                             RNase-Free Water                   up to 15  μl

                             

                             

                                 3.70℃孵育10分鐘,迅速冰浴2分鐘。

                                 4.短暫離心,使管壁上的溶液收集到管底。

                                 5.繼續(xù)向以上反應(yīng)液中加入以下試劑:

                             

                            試劑                  20 μl反應(yīng)體系                 終濃度

                            5×RT Buffer            4 μl                              

                                     注意:若起始RNA的量小于50 ng,則建議加入RNA酶抑制劑(RNasin)。本試劑盒并未提供,

                                     如需要可單獨(dú)向本公司訂購(gòu),貨號(hào):YJ0596。

                             

                                 6.輕輕吹打混勻,若反轉(zhuǎn)錄引物為Oligo-dT  Primer或Specific  Primer時(shí),42℃孵育2分 

                                    鐘;若反轉(zhuǎn)錄引物為Random Primers,則25℃孵育10分鐘。

                                 7.加入1 μl SuperRT(200 U/μl),輕輕吸打混勻。42℃孵育50分鐘。

                                 8.85℃孵育5分鐘。反應(yīng)結(jié)束后,短暫離心,置于冰上冷卻。

                                 9.逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可直接用于PCR反應(yīng)和熒光定量PCR反應(yīng),或置于-20℃長(zhǎng)期保存。

                             

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                            滬公網(wǎng)安備 31011802001677號(hào)

                            日韩色综合_久久久久久精品国产观看2010_日本视频精品_久久精品国产亚洲av夜色九虎_来一水AV@lysav

                                  
                                  

                                      
                                      

                                                
                                                

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