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                            網(wǎng)站首頁(yè)技術(shù)中心 > SuperRT cDNA*鏈合成試劑盒說明書
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                            SuperRT cDNA*鏈合成試劑盒說明書
                            更新時(shí)間:2015-05-14 點(diǎn)擊量:1581

                                              SuperRT cDNA*鏈合成試劑盒說明書

                             

                             SuperRT cDNA Kit

                            目錄號(hào):YJ0741

                            保存條件:-20℃保存。

                            組分說明

                             

                                       Cat. No.                     YJ0741        YJ0741A

                                       Kit Size                        25            100

                                       SuperRT,200 U/μl               25 μl        100 μl

                                       5×RT Buffer                   120 μl        500 μl

                                       Primer Mix                     60 μl        240 μl

                                       dNTP Mix,2.5 mM Each          120 μl        500 μl

                                       RNase-Free Water               1 ml          1 ml

                             

                             

                                         本產(chǎn)品僅供科研使用,請(qǐng)勿用于臨床診斷及其他用途  

                             

                             

                            產(chǎn)品簡(jiǎn)介

                             

                              本產(chǎn)品是專為兩步法RT-PCR*步實(shí)驗(yàn)配制的cDNA*鏈合成試劑盒。該試劑

                            盒中使用的逆轉(zhuǎn)錄酶是一種利用大腸桿菌工程菌進(jìn)行重組與表達(dá)的全新逆轉(zhuǎn)錄酶,

                            去除了RNase H活性并增強(qiáng)了其熱穩(wěn)定性,可利用極低量的總RNA或mRNA合成cDNA

                            *鏈,起始樣本量可低至pg級(jí)。SuperRT逆轉(zhuǎn)錄酶與RNA親合能力強(qiáng),能通讀GC含

                            量高,二級(jí)結(jié)構(gòu)復(fù)雜的RNA模板,獲得高產(chǎn)量的cDNA。

                              本產(chǎn)品包含從RNA模板逆轉(zhuǎn)錄成cDNA*鏈所需的所有試劑,含有Super RT

                            逆轉(zhuǎn)錄酶、反應(yīng)緩沖液、引物、dNTP等,使用簡(jiǎn)單方便。本系統(tǒng)對(duì)后續(xù)的PCR以及定

                            量PCR試驗(yàn)兼容性高,適用各種PCR反應(yīng)的DNA聚合酶。

                             

                            產(chǎn)品特點(diǎn)

                             

                            ·逆轉(zhuǎn)錄:與RNA模板親和力高,逆轉(zhuǎn)錄效率高達(dá)90%,可識(shí)別pg級(jí)別的模板。

                            ·自由應(yīng)對(duì)復(fù)雜模板:即使GC含量高,二級(jí)結(jié)構(gòu)復(fù)雜的模板,無需高溫變性,也可得

                              到良好結(jié)果。

                            ·使用方便:試劑盒包含除RNA模板外的逆轉(zhuǎn)錄所需全部試劑。

                             

                            注意事項(xiàng)

                             

                            1.在操作過程中應(yīng)避免RNase污染,防止RNA降解或?qū)嶒?yàn)中的交叉污染,建議在專門

                               的區(qū)域進(jìn)行RNA操作,使用專門的儀器和耗材,操作人員帶口罩和一次性手套并經(jīng)

                               常更換手套。

                            2.實(shí)驗(yàn)盡量使用一次性塑料器皿,若使用玻璃器皿,應(yīng)使用0.1%DEPC(焦碳酸二乙

                               酯)水溶液在37℃處理12小時(shí),并在120℃下高壓滅菌30分鐘后使用,或者將玻璃

                               器皿在180℃下干熱滅菌60分鐘后使用。實(shí)驗(yàn)中用到的無菌水應(yīng)使用 0.1%的DEPC

                               處理后進(jìn)行高壓滅菌。

                            3.本試劑盒中的所有試劑使用前請(qǐng)上下顛倒輕輕混勻,盡量避免起泡,并經(jīng)短暫離心

                               后使用。所涉及的酶類使用后應(yīng)盡快放回-20℃,避免反復(fù)凍融。

                            4.若起始RNA的量小于50  ng,建議加入RNA酶抑制劑(RNasin)。本試劑盒并未提

                               供,如需要可單獨(dú)向本公司訂購(gòu),貨號(hào):YJ0596。

                             

                            使用方法

                             

                            注意:1 ng-5 μg總RNA可建立20 μl反應(yīng)體系,如果總RNA量大于5 μg,請(qǐng)按比例擴(kuò)大反應(yīng)體系。

                             i逆轉(zhuǎn)錄操作步驟:

                            1.將RNA模板、Primer Mix、dNTP Mix、RT  Buffer、SuperRT和RNase-Free Water

                               溶解并置于冰上備用。

                            2.根據(jù)以下表格配置反應(yīng)體系,總體積為20 μl。

                             

                            試劑                            20 μl反應(yīng)體系              終濃度

                            dNTP Mix,2.5 mM Each                 4  μl          500 μM Each

                            Primer Mix                           2  μl

                            RNA Template                         X  μl           50 pg-5 μg

                            5×RT Buffer                          4  μl               1×

                            SuperRT,200 U/μl                     1  μl

                            RNase-Free Water                 up to 20  μl

                             

                               注意:1)若起始RNA的量小于50 ng,則建議加入RNA酶抑制劑(RNasin)。本試劑盒并未提供,如需要可單獨(dú)向本公司訂購(gòu),貨號(hào):YJ0596。

                               2)Primer Mix由Oligo(dT)和Random Primer配制而成。

                            3.渦旋震蕩混勻,短暫離心,使管壁上的溶液收集到管底。

                            4.42℃孵育30-50分鐘,85℃孵育5分鐘。反應(yīng)結(jié)束后,短暫離心,置于冰上冷卻。

                            5.逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可直接用于PCR反應(yīng)和熒光定量PCR反應(yīng),或置于-20℃長(zhǎng)期保存。

                            ii  若逆轉(zhuǎn)錄效率低,或RNA模板二級(jí)結(jié)構(gòu)復(fù)雜、GC含量高時(shí),建議采用以下步驟:

                            1.將RNA模板、Primer Mix、dNTP Mix、RT  Buffer、SuperRT和RNase-Free Water

                               溶解并置于冰上備用。

                            2.根據(jù)以下表格配置反應(yīng)體系,總體積為15 μl。

                             

                            試劑                           20 μl反應(yīng)體系             終濃度

                            dNTP Mix,2.5 mM Each                 4  μl         500 μM Each

                            Primer Mix                           2  μl

                            RNA Template                         X  μl          50 pg-5 μg

                            RNase-Free Water                  up to 15  μl

                             

                            3.70℃孵育10分鐘,迅速冰浴2分鐘。

                            4.短暫離心,使管壁上的溶液收集到管底。

                             

                            5.繼續(xù)向以上反應(yīng)液中加入以下試劑:

                             

                            試劑                        20 μl反應(yīng)體系                 終濃度

                            5×RT Buffer                    4  μl                  1×

                             

                                    注意:1)若起始RNA的量小于50 ng,則建議加入RNA酶抑制劑(RNasin)。本試劑盒并未提供,如需要可單獨(dú)向本公司訂購(gòu),貨號(hào):YJ0596。

                                    2)Primer Mix由Oligo(dT)和Random primer配制而成。

                             

                                 6.輕輕吹打混勻,加入1 μl SuperRT(200 U/μl),輕輕吸打混勻。42℃孵育50分鐘。

                                 7.85℃孵育5分鐘。反應(yīng)結(jié)束后,短暫離心,置于冰上冷卻。

                                 8.逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可直接用于PCR反應(yīng)和熒光定量PCR反應(yīng),或置于-20℃長(zhǎng)期保存。

                             

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                            滬公網(wǎng)安備 31011802001677號(hào)

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