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                            大量瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒說明書
                            更新時(shí)間:2015-05-20 點(diǎn)擊量:1606

                            大量瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒說明書

                             

                             

                            MaxiGel Extraction Kit

                            號(hào):  YJ0518

                            保   存:  室溫

                            組分說明

                            Cat.No.

                            YJ0518

                            50

                            KitSize

                            BufferPG

                            100ml

                            15ml

                            10ml

                            10ml

                            50

                            BufferPS

                            BufferPW(concentrate)

                            BufferEB

                            SpinColumnDL 

                            CollectionTube(2ml)

                            50

                            產(chǎn)品簡(jiǎn)介

                                 本試劑盒采用新型硅基質(zhì)膜技術(shù),通過快速,簡(jiǎn)單的結(jié)合-洗滌-洗脫步驟可從大量普通或低熔點(diǎn)瓊脂糖凝膠中回收純

                            化 50bp-50kb 的 DNA 片段,溶膠速度快,每個(gè)吸附柱zui高可吸附 30 μg 的 DNA,純化過程中有效去除引物、核苷酸、

                            酶、礦物油、瓊脂糖等雜質(zhì),獲得高純度,完整性好的 DNA 片段,回收率高達(dá) 90%。本試劑盒回收純化的 DNA 可直接用

                            于測(cè)序、連接和轉(zhuǎn)化、酶切、標(biāo)記、體外轉(zhuǎn)錄等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

                            注意事項(xiàng)

                            1..*次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說明在BufferPW中加入無水乙醇。

                            2.使用前請(qǐng)檢查BufferPG是否出現(xiàn)結(jié)晶或者沉淀,如有結(jié)晶或者沉淀現(xiàn)象,可在37℃水浴幾分鐘,即可恢復(fù)澄清。

                            3.電泳時(shí)使用新的電泳緩沖液,以免影響電泳和回收效果。

                            4.切膠時(shí),紫外照射時(shí)間應(yīng)盡量短,以免對(duì)DNA造成損傷。

                            5.回收率與初始 DNA 量和洗脫體積有關(guān)。

                            6.所有離心步驟均為使用常規(guī)臺(tái)式離心機(jī)室溫下進(jìn)行離心。

                            自備:無水乙醇,離心管

                             

                            操作步驟

                             

                            1. 將單一目的DNA條帶從瓊脂糖凝膠中切下(盡量切除多余部分),放入干凈的離心管(自備)中,稱取重量。 

                            注意:若膠塊的體積過大,可將膠塊切成碎塊。

                            2. 向膠塊中加入3倍體積Buffer PG;當(dāng)瓊脂糖凝膠濃度>2%時(shí),建議使用6倍體積BufferPG(如凝膠重為100mg,其體積可視為100μl,依此類推)。

                            3. 50℃孵育10分鐘,其間不斷溫和地上下顛倒離心管,以確保膠塊充分溶解。如果還有未溶的膠塊,可再補(bǔ)加一些溶膠液或繼續(xù)放置幾分鐘,直至膠塊*溶解。

                            注意:1)在膠充分溶解后檢測(cè)pH值,若pH值大于7.5,可向含有DNA的膠溶液中加10-30μl 的3M醋酸鈉(pH5.0)將pH值調(diào)到5-7。

                                  2)膠塊*溶解后將膠溶液溫度降至室溫再上柱,因?yàn)槲街谳^高溫度時(shí)結(jié)合 DNA 的能力較弱。

                            4.(可選步驟)當(dāng)回收片段<500bp或>4kb時(shí),應(yīng)加入1倍膠體積的異丙醇,上下顛倒混勻(如凝膠為100mg,則加入100μl異丙醇)。

                            注意:當(dāng)回收片段為500bp-4kb時(shí),加入異丙醇不會(huì)影響回收率。

                            5.柱平衡:向已裝入收集管(CollectionTube)中的吸附柱(SpinColumnDL)中加入200  μl Buffer PS,12,000rpm(~13,400×g)離心2分鐘,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。

                            6.將步驟3或者步驟4所得溶液加入到已裝入收集管的吸附柱中,室溫放置2分鐘,12,000rpm離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱放回收集管中。

                            注意:吸附柱容積為700μl,若樣品體積大于700μl 可分批加入。

                            7.(可選步驟)向吸附柱中加入500μlBufferPG,12,000rpm離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱放回收集管中。

                            注意:如果后續(xù)實(shí)驗(yàn)用于直接測(cè)序、體外轉(zhuǎn)錄或顯微注射,推薦用此步驟以除去所有凝膠。8. 向吸附柱中加入650 μl Buffer PW(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇),12,000rpm離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱放回收集管中。

                            9. 注意:如果純化的DNA用于鹽敏感的實(shí)驗(yàn)(例如平末端連接或直接測(cè)序),建議加入BufferPW靜置2-5分鐘再離心。12,000rpm離心2分鐘,倒掉收集管中的廢液。將吸附柱置于室溫?cái)?shù)分鐘,以*晾干。

                            注意:這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除,乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶促反應(yīng)(酶切、PCR等)。為確保下游實(shí)驗(yàn)不受殘留乙醇的影響,建議將吸附柱開蓋,置于室溫放置數(shù)分鐘,以*晾干吸附材料中殘余的乙醇。

                            10.  將吸附柱放到一個(gè)新離心管(自備)中,向吸附膜中間位置懸空滴加100 μl Buffer EB(pH 8.5),室溫放置2分鐘。12,000rpm離心2分鐘,收集DNA溶液。-20℃保存DNA。注意:1) 洗脫液的pH值對(duì)于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液,應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH將水的pH值調(diào)到此范圍)。

                            2) 為了提高DNA的回收量,可將離心得到的溶液重新滴加到吸附柱中,重復(fù)步驟10。

                            3) 洗脫體積不應(yīng)小于50μl,體積過少會(huì)影響回收效率。

                            4) 如果使用TE洗脫,需要考慮其中含有的EDTA是否會(huì)影響后續(xù)的酶促反應(yīng)。

                            5)回收大于10kb的DNA片段時(shí),BufferEB應(yīng)在50℃水浴中預(yù)熱,適當(dāng)延長(zhǎng)吸附和洗脫時(shí)間,可增加回收效率。

                             

                             

                             

                            滬公網(wǎng)安備 31011802001677號(hào)

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