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                            加A試劑盒說明書
                            更新時間:2015-06-10 點擊量:1017

                             

                            加A試劑盒說明書

                             

                            A-Tailing Kit

                            加A試劑盒

                            目錄號:YJ0803

                             

                             

                            保存條件:-20℃保存。

                             

                            組分說明

                             

                                                Cat. No.                       YJ0803

                                                Size                             20次

                                                A-Tailing Enzyme(5 U/μl)         25 μl

                                                10×A-Tailing Buffer             120 μl

                                                dATP,2 mM                        25 μl

                             

                             

                            本產(chǎn)品僅供科研使用,請勿用于臨床診斷及其他用途

                             

                                                                                    

                             

                                產(chǎn)品簡介

                             

                                  利用具有3’-5’外切酶活性的高保真DNA聚合酶,如Pfu等進行PCR擴增時,其PCR產(chǎn)物為不帶  A尾的平末端  DNA片段,如想將該片段克隆到     T載體上,需要先利用A-Tailing  Enzyme在平末端片段后加上A尾后才能與T載體上3’末端的T堿基互補連接。

                                本產(chǎn)品是在平末端 DNA片段的3’末端添加一個A尾,使平末端的 DNA片段進行TA克隆

                            成為可能。本試劑盒提供了加A尾需要的所有成分,可以在30分鐘完成整個過程。與平

                                末端DNA片段克隆相比,TA克隆具有較高的克隆效率,可大大提高實驗成功率。

                             

                                使用方法

                             

                                1.將平末端PCR產(chǎn)物進行純化,若 PCR無非特異擴增可用 DNA產(chǎn)物回收試劑盒進行純化,若 PCR產(chǎn)物有非特異性擴增可用膠回收純化試劑盒進行純化。

                                2.將以上純化好的平末端DNA片段按以下反應體系加A尾:

                             

                                                       試劑                      10 μl體系

                                                       平末端 DNA片段             X μl(<1 μg)

                                                       dATP                       1 μl 

                                                       10×A-Tailing Buffer        1 μl 

                                                       A-Tailing Enzyme           1 μl 

                                                       RNase-Free Water       補足至 10 μl 

                             

                                3.輕輕混勻后72℃孵育30 min。

                             

                                   注意:加A尾的產(chǎn)物可以不需要再次純化,可直接用于連接反應。

                             

                            滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

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