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                            人瘧疾ELISA試劑盒說明書
                            更新時間:2015-08-28 點擊量:651

                            人瘧疾酶聯(lián)免疫分析(ELISA)

                            試劑盒使用說明書

                            本試劑僅供研究使用

                            目的:本試劑盒用于測定人血清,血漿及相關(guān)

                            液體樣本中瘧疾。

                            實驗原理:

                            本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法(ELISA)測定標本中人瘧疾。用純化的瘧疾抗體包

                            被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中瘧疾相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后

                            再與  HRP標記的瘧疾抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物

                            TMB顯色。TMB在    HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用

                            酶標儀在 450nm波長下測定吸光度(OD值),與   CUTOFF值相比較,從而判定標本中瘧疾

                            的存在與否。

                            操作步驟:

                            1.編號:將樣品對應(yīng)微孔按序編號,每板應(yīng)設(shè)陰性對照 2孔、陽性對照  2孔、空白對照   1

                            孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)

                            2.加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照   50μl。然后在待測樣品孔先

                            加樣品稀釋液  40μl,然后再加待測樣品  10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不

                            觸及孔壁,輕輕晃動混勻,

                            3.溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。

                            4.配液:將 3048T的  20倍)倍濃縮洗滌液加蒸餾水至  600ml后備用

                            5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30秒后棄去,如此

                            重復(fù) 5次,拍干。

                            6.加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。

                            7.溫育:操作同 3

                            8.洗滌:操作同 5

                            9.顯色:每孔先加入顯色劑 A 50μl,再加入顯色劑 B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

                            15分鐘

                            10.終止:每孔加終止液    50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

                            11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應(yīng)在加終止

                            液后 15分鐘以內(nèi)進行。

                            結(jié)果判定:

                            試驗有效性:陽性對照孔平均值1.00;陰性對照平均值0.10

                            臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

                            陰性判定:樣品 OD<臨界值(CUT    OFF)者為人瘧疾陰性

                            陽性判定:樣品 OD臨界值(CUT    OFF)者為人瘧疾陽性

                            注意事項

                            1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。

                            2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未

                            用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

                            3.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。

                            4.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

                            5.底物請避光保存。

                            6.試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,使用雙波長檢測時,參考波長為  630nm

                            7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為 2M的硫酸,使用時必須

                            注意安全。

                            保存條件及有效期

                            1.試劑盒保存:;2-8℃。

                            2.有效期:6個月


                            滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

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