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                            豚鼠外周血單個(gè)核細(xì)胞分離液說明書
                            更新時(shí)間:2016-02-24 點(diǎn)擊量:966

                            豚鼠外周血單個(gè)核細(xì)胞分離液說明書LDS1083

                              

                            豚鼠外周血單個(gè)核細(xì)胞分離液說明書

                            【包裝規(guī)格】
                            200ml/
                            【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】
                            A.適用儀器
                            zui大離心力可達(dá)1200g的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)
                            B.耗材

                             

                             

                            產(chǎn)品名稱

                            產(chǎn)品貨號

                            產(chǎn)地

                            15ml離心管散裝

                            339650

                            美國  NUNC

                            15ml離心管架裝

                            339651

                            美國  NUNC

                            50ml離心管散裝

                            339652

                            美國  NUNC

                            50ml離心管架裝

                            339653

                            美國  NUNC

                            無菌膠頭滴管或塑料滴管

                             

                             

                            【檢驗(yàn)方法】
                            全過程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在20±2的條件下進(jìn)行。
                            首先根據(jù)樣本量大小,分以下幾種情況:
                            一、使用15ml離心管時(shí):
                            情況A:血液樣本量小于 3ml時(shí),實(shí)驗(yàn)方法如下:
                            1.取一支15ml離心管,加入3ml分離液。
                            2.用吸管小心吸取血液樣本加于分離液之液面上,400-650g,離心20-30min(注:根據(jù)血
                            液樣本量確定離心條件,血液樣本量越多,離心力越大,離心時(shí)間越長,具體離心條件
                            需客戶自行摸索,以達(dá)到分離效果)。
                            3.離心后,此時(shí)離心管中由上至下分為四層。*層為血漿層。第二層為環(huán)狀乳白色單個(gè)
                            核細(xì)胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細(xì)胞層。
                            4.用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色單個(gè)核細(xì)胞層到另一15ml離心管中,向所得離心管
                            中加入10ml清洗液(產(chǎn)品編號:2010X1118),混勻細(xì)胞。
                            5. 250g,離心10min
                            6.棄上清。
                            7.用吸管以5ml清洗液(產(chǎn)品編號:2010X1118)重懸所得細(xì)胞。
                            8. 250g,離心10min
                            9.重復(fù)678,棄上清后以0.5ml后續(xù)實(shí)驗(yàn)所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞。
                            情況B:血液樣本量為3-6ml時(shí),實(shí)驗(yàn)方法如下:
                            1.取一支15ml離心管,先加入與血液樣本等量的分離液。
                            2.用吸管小心吸取血液樣本加于分離液之液面上,400-650g,離心20-30min(注:根據(jù)血
                            液樣本量確定離心條件,血液樣本量越多,離心力越大,離心時(shí)間越長,具體離心條件
                            需客戶自行摸索,以達(dá)到分離效果,但zui大離心力不超過1000g)。
                            3.離心后,此時(shí)離心管中由上至下分為四層。*層為血漿層。第二層為環(huán)狀乳白色單個(gè)
                            核細(xì)胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細(xì)胞層。
                            4.用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色單個(gè)核細(xì)胞層到另一15ml離心管中,向所得離心管
                            中加入10ml清洗液(產(chǎn)品編號:2010X1118),混勻細(xì)胞。
                            5. 250g,離心10min
                            6.棄上清。
                            7.用吸管以5ml清洗液(產(chǎn)品編號:2010X1118)重懸所得細(xì)胞。
                            8. 250g,離心10min
                            9.重復(fù)678,棄上清后以0.5ml后續(xù)實(shí)驗(yàn)所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞。
                            二、使用50ml離心管時(shí):
                            情況A:血液樣本量為6-10ml時(shí),實(shí)驗(yàn)方法如下:
                            1.取一支50ml離心管,先加入與血液樣本等量的分離液。
                            2.用吸管小心吸取血液樣本加于分離液之液面上,500-950g,離心20-30min(注:根據(jù)血
                            液樣本量確定離心條件,血液樣本量越多,離心力越大,離心時(shí)間越長,具體離心條件
                            需客戶自行摸索,以達(dá)到分離效果,但zui大離心力不超過1200g)。
                            3.離心后,此時(shí)離心管中由上至下分為四層。*層為血漿層。第二層為環(huán)狀乳白色單個(gè)
                            核細(xì)胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細(xì)胞層。
                            4.用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色單個(gè)核細(xì)胞層到另一15ml離心管中,向所得離心管
                            中加入10ml清洗液(產(chǎn)品編號:2010X1118),混勻細(xì)胞。
                            5. 250g,離心10min
                            6.棄上清。
                            7.用吸管以5ml清洗液(產(chǎn)品編號:2010X1118)重懸所得細(xì)胞。
                              8. 250g,離心10min
                            9.重復(fù)678,棄上清后以0.5ml后續(xù)實(shí)驗(yàn)所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞。
                            情況B:血液樣本量為10-20ml時(shí),實(shí)驗(yàn)方法如下:
                            1.取一支50ml離心管,先加入與血液樣本等量的分離液。
                            2.用吸管小心吸取血液樣本加于分離液之液面上,650-110g,離心20-30min(注:根據(jù)血
                            液樣本量確定離心條件,血液樣本量越多,離心力越大,離心時(shí)間越長,具體離心條件
                            需客戶自行摸索,以達(dá)到分離效果,但zui大離心力不超過1200g)。
                            3.離心后,此時(shí)離心管中由上至下分為四層。*層為血漿層。第二層為環(huán)狀乳白色單個(gè)
                            核細(xì)胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細(xì)胞層。
                            4.用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色單個(gè)核細(xì)胞層到另一15ml離心管中,向所得離心管
                            中加入10ml清洗液(產(chǎn)品編號:2010X1118),混勻細(xì)胞。
                            5. 250g,離心10min
                            6.棄上清。
                            7.用吸管以5ml清洗液(產(chǎn)品編號:2010X1118)重懸所得細(xì)胞。
                            8. 250g,離心10min
                            9.重復(fù)678,棄上清后以0.5ml后續(xù)實(shí)驗(yàn)所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞。
                            【注意事項(xiàng)】
                            1.全過程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在20±2的條件下進(jìn)行。為獲得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,
                            在取血2h內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn),血液存放時(shí)間越長,細(xì)胞分離效果越差。血液放置超過6h
                            后分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的。
                            2.本實(shí)驗(yàn)不要使用高聚合材質(zhì)(如聚苯乙烯)的塑料制品,應(yīng)使用無靜電、低靜電離
                            心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品,因?yàn)殪o電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面
                            會變成毛面,影響細(xì)胞分離效果。
                            3.吸取過多的單個(gè)核細(xì)胞層及分離液層會導(dǎo)致分離液交界處的粒細(xì)胞被吸出從而使混雜的
                            粒細(xì)胞數(shù)量增加。
                            4.吸取過多的單個(gè)核細(xì)胞層上層溶液會導(dǎo)致血漿蛋白及血小板混雜。
                            5.如所實(shí)驗(yàn)后細(xì)胞得率或活性過低,請上海研謹(jǐn)以尋求幫助,具體
                            詳見下方生產(chǎn)企業(yè)信息。
                            6.當(dāng)血液樣本粘度過高需稀釋時(shí),*稀釋方法:將血液與樣本稀釋液(產(chǎn)品編號:
                            2010C11191:1稀釋混勻備用。注:不當(dāng)?shù)南♂尫椒〞档图?xì)胞得率及活性。如血液樣
                              本經(jīng)過稀釋則分離過程中需適當(dāng)降低離心力和離心時(shí)間。
                            【儲存條件及有效期】
                            18-25保存,有效期2年。本品易感染細(xì)菌,需無菌條件操作。無菌條件下操作,啟
                            封后置常溫保存。如4保存,本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。
                            【參考值(參考范圍)】
                            本實(shí)驗(yàn)淋巴細(xì)胞提取率及純度均大于80%
                            下表為成年人外周血中各種細(xì)胞的數(shù)量及比例,用戶可適當(dāng)進(jìn)行參考。

                             
                            【相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)方案】
                            1.所獲得淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)。
                            2.所獲得淋巴細(xì)胞的核酸提取技術(shù)。
                            3.所獲得淋巴細(xì)胞的鑒定方法
                            A.流式細(xì)胞技術(shù)
                            B.免疫組化技術(shù)
                            C.原位雜交技術(shù)
                            D.PCR技術(shù)
                            注:上述技術(shù)方案詳情請登陸上海研謹(jǐn)生物公司搜索細(xì)胞分離、
                            純化、擴(kuò)增、鑒定及生物治療技術(shù)手冊,并在說明書項(xiàng)目欄下下載使用。
                            【可能存在的問題及解決方法】
                            1.由于血液粘度、細(xì)胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示:

                            出現(xiàn)情況

                            出現(xiàn)原因

                            建議解決方案

                            離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層

                            轉(zhuǎn)速過小或離心時(shí)間過短

                            適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速

                            離心后目的細(xì)胞存在于分離液中

                            轉(zhuǎn)速過大或離心時(shí)間過長

                            適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速

                            離心后白環(huán)層彌散

                            細(xì)胞密度過大

                            調(diào)整細(xì)胞密度

                            離心后白環(huán)層太淺或看不

                            細(xì)胞密度過小

                            調(diào)整細(xì)胞密度

                            2.本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心,其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地
                            區(qū)客戶可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對離心條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。建議對離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí),恒定離
                            心時(shí)間,對離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行調(diào)整。
                            3.本分離液依照標(biāo)準(zhǔn),全部使用藥用級原料,性能指標(biāo)與國產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同,可
                            能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不*的情況,可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速。
                            注:在對離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí),離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g為基數(shù),直至達(dá)到分離效果,
                            離心力zui小不得小于 400g,zui大不得大于 1200g。離心時(shí)間以 20-30min為準(zhǔn)。

                             

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