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                            網(wǎng)站首頁技術中心 > 大鼠外周血白細胞分離液試劑盒
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                            大鼠外周血白細胞分離液試劑盒
                            更新時間:2016-06-12 點擊量:2055

                            WBC1083大鼠外周血白細胞分離液試劑盒

                             

                             
                            大鼠外周血白細胞分離液說明書
                            (細胞培養(yǎng)及分子生物學)
                            【產(chǎn)品規(guī)格】
                            200ml/Kit
                            【產(chǎn)品組成】
                            為方便廣大用戶使用,試劑內容如下:

                             

                            名稱

                            產(chǎn)品規(guī)格

                            編號

                            A

                            大鼠外周血白細胞分離液

                             

                            200ml

                            B

                            樣本稀釋液(贈品)

                            2010C1119

                            200ml

                            C

                            清洗液(贈品)

                            2010X1118

                            200ml

                            D

                            紅細胞裂解液(贈品)

                            NH4CL2009

                            100ml

                            E

                            說明書

                             

                            1份
                             

                            【實驗前準備】
                            A.適用儀器
                            zui大離心力可達 1200g的水平轉子離心機
                            B.耗材

                            產(chǎn)品名稱

                            產(chǎn)品貨號

                            產(chǎn)地

                            15ml離心管散裝

                            339650

                            美國  NUNC

                            15ml離心管架裝

                            339651

                            美國  NUNC

                            50ml離心管散裝

                            339652

                            美國  NUNC

                            50ml離心管架裝

                            339653

                            美國  NUNC

                            無菌膠頭滴管或塑料滴管

                             

                             

                            【檢驗方法】
                            全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2的條件下進行。
                            首先取抗凝血,根據(jù)樣本量大小,分以下兩種情況:
                            情況 A:血液樣本量小于 5ml時,實驗方法如下:
                            1.取一支15ml離心管,先加入  5ml分離液
                            2.用吸管小心吸取血液樣本加于分離液液面上,400-500g,離心20-30min(注:如改
                             變血液樣本及分離液用量,需相應調整離心力及離心時間,具體離心條件需客戶自行摸

                            索,以達到分離效果。)
                            3.離心后用吸管小心吸取所有環(huán)狀乳白色細胞層(一層或兩層),加入10 ml清洗液(產(chǎn)
                            品編號:2010X1118),混勻細胞。250g,離心 10min。重復洗滌 2-3次,即得所需白細
                            胞。
                            4.如有紅細胞殘留請使用紅細胞裂解液(產(chǎn)品編號:NH4CL2009)裂解紅細胞,具體操
                            作方法詳見“紅細胞裂解液使用說明”。
                            情況 B:血液樣本量大于等于 5ml 時,實驗方法如下:
                            1.取一支適當?shù)碾x心管,先加入與樣本等量的分離液。
                            2.將血液樣本小心加于分離液之液面上, 450-650g(zui大離心力可至 1000g),離心
                            20-30min。(注:根據(jù)血液樣本量確定離心條件,血液量越多,離心力越大,離心
                            時間越長,具體離心條件需客戶自行摸索,以達到分離效果。加入血液樣本后,樣
                            本及分離液總體積不得超過離心管總體積的三分之二)。
                            3.剩余步驟同“情況 A”中步驟 3與步驟  4。
                            【注意事項】
                            1.全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2的條件下進行。為獲得的實驗結果,zui
                            好在取血 2h 內進行實驗,血液存放時間越長,細胞分離效果越差。血液放置超過 6h 后
                            分離效果更差甚至不能達到分離目的。
                            2.本實驗不要使用高聚合材質(如聚苯乙烯)的塑料制品,應使用無靜電、低靜電離
                            心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品,因為靜電作用將導致細胞貼壁、堿處理的玻璃表面
                            會變成毛面,影響細胞分離效果。
                            3.分離液用量大于稀釋后血液樣本時,分離效果更佳。
                            4.當血液樣本粘度過高需稀釋時,*稀釋方法:將血液與樣本稀釋液(產(chǎn)品編號:
                            2010C1119)1:1稀釋混勻備用。注:不當?shù)南♂尫椒〞档图毎寐始盎钚浴H缪簶?/span>
                            本經(jīng)過稀釋則分離過程中需適當降低離心力和離心時間。
                            5.如實驗后細胞得率或活性過低,請技術以尋求幫助支持。
                            【儲存條件及有效期】
                            18-25保存,有效期 2年。本品易感染細菌,需無菌條件操作。無菌條件下操作,啟
                            封后置常溫保存。如 4保存,本分離液易出現(xiàn)白色結晶,影響分離效果。
                            【參考值(參考范圍)】

                            本實驗白細胞提取率及純度大于 80%。
                            下表為成年人外周血中各種細胞的數(shù)量及比例,用戶可適當進行參考。

                            【相關實驗技術方案】
                            1.所獲得白細胞的培養(yǎng)技術。
                            2.所獲得白細胞的核酸提取技術。
                            3.所獲得白細胞的鑒定方法
                            A.流式細胞技術
                            B.免疫組化技術
                            C.原位雜交技術
                            D.PCR技術
                            注:上述技術方案詳情請登陸本搜索“細胞分離、
                            純化、擴增、鑒定及生物治療技術手冊”,并在說明書項目欄下下載使用。
                            【可能存在的問題及解決方法】
                            1.由于血液粘度、細胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示:

                            出現(xiàn)情況

                            出現(xiàn)原因

                            建議解決方案

                            離心后目的細胞存在于血漿層或稀釋液層

                            轉速過小或離心時間過短

                            適當增減轉速

                            離心后目的細胞存在于分離液中

                            轉速過大或離心時間過長

                            適當增減轉速

                            離心后白環(huán)層彌散

                            細胞密度過大

                            調整細胞密度

                            離心后白環(huán)層太淺或看不見

                            細胞密度過小

                            調整細胞密度

                            2.本分離液分離細胞的原理為密度梯度離心,其密度與溫度、大氣壓等密切相關。不同地
                            區(qū)客戶可根據(jù)當?shù)厍闆r對離心條件進行適當調整。建議對離心條件進行調整時,恒定離
                            心時間,對離心轉速進行調整。
                            3.本分離液依照標準,全部使用藥用級原料,性能指標與國產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同,可
                            能出現(xiàn)紅細胞沉降不*的情況,可以適當加大離心轉速。
                            注:在對離心條件進行調整時,離心轉速的加減以 50-100g為基數(shù),直至達到分離效果,
                              離心力zui小不得小于 400g,zui大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min為準。

                            滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

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